抗人類皰疹病毒6型南京株E5單克隆抗體的制備、鑒定及初步應用.pdf

1、人類皰疹病毒6型(Human herpesvirus 6，HHV-6)是一類嗜人類淋巴細胞的雙鏈DNA病毒，于1986年由美國癌癥中心的Salahuddin等首先從淋巴增生及AIDS患者外周血單個核細胞中分離到，與人類皰疹病毒7型(HHV-7)及人巨細胞病毒(CMV)同屬于皰疹病毒β亞科。目前認為HHV-6是嬰幼兒急疹(ES)的病因，另外還與神經膠質瘤、腦膜腦炎、AIDS、慢性疲勞綜合癥、器官移植后感染、多發(fā)性硬化癥等多種疾病有關，但其

2、致病機理目前尚未清楚。 HHV－6基因組為一線性雙鏈DNA分子，大小約160～170Kbp，結構上可分為3個部分，即序列獨特區(qū)(UL區(qū))，左右末端各有一個正向重復序列(DRL和DRR區(qū))，且有119個開放讀碼框(ORF)。根據其基因結構差異和抗原性可分為HHV-6A、B兩種亞型，GS、U1102是HHV-6A亞型代表株，而Z29是B亞型代表株，且序列的同源性在96％以上，HHV-6廣泛存在于健康成人及兒童外周血淋巴細胞和唾液中，

3、其原發(fā)感染一般發(fā)生在6個月～2歲的嬰幼兒，高峰期在6～9個月，其后在體內建立持續(xù)性感染，并長期呈潛伏感染。 我室于1994年在國內首次分離鑒定出HHV－6南京地方株8株，并詳細研究了南京株E5(CN5)的病毒學、免疫學、生物學特性及病毒形態(tài)學超微結構，為本次研究奠定了良好的基礎。 本研究采用蔗糖密度梯度離心法純化的南京株HHV-6 E5病毒抗原免疫8周齡、雌性BALB/c小鼠，采用常規(guī)方法融合，間接ELISA方法篩選，并

4、經3次有限稀釋法亞克隆后，獲得3株能持續(xù)穩(wěn)定分泌特異性抗HHV-6抗體的雜交瘤細胞株，分別命名為JA9、JYE7、JYE8。將獲得的3株雜交瘤細胞株傳代擴增，注射到用Pristane預刺激的BALB/c小鼠體內制備腹水，并進行初步純化。單抗Ig亞類鑒定表明：JA9為IgG1，κ亞型、JYE7和JYE8為IgM，λ亞型；腹水效價分別為1:0.8X105、1:0.256 X105、1:0.128 X105；雜交瘤細胞染色體計數顯示3株細胞染

5、色體數均約95條以上；間接免疫熒光實驗顯示：3株單抗均能與HHV-6 E5感染的CBMCs呈陽性反應，而與未感染CBMCs呈陰性反應；其中JA9單抗Western-blot實驗結果進一步表明其可與HHV-6 E5約75ku大小的病毒蛋白結合。 本研究收集口腔腫瘤(口腔鱗癌及其癌前病變)、腦腫瘤(神經膠質瘤及腦膜瘤)、嬰幼兒急疹、免疫抑制劑使用者(腎移植及腎病綜合癥)及健康人群唾液標本分別為41份、40份、36份、37份、40份，