抗人類皰疹病毒6型南京株E5單克隆抗體的制備、鑒定及初步應(yīng)用.pdf

1、人類皰疹病毒6型(Human herpesvirus 6，HHV-6)是一類嗜人類淋巴細(xì)胞的雙鏈DNA病毒，于1986年由美國(guó)癌癥中心的Salahuddin等首先從淋巴增生及AIDS患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中分離到，與人類皰疹病毒7型(HHV-7)及人巨細(xì)胞病毒(CMV)同屬于皰疹病毒β亞科。目前認(rèn)為HHV-6是嬰幼兒急疹(ES)的病因，另外還與神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦膜腦炎、AIDS、慢性疲勞綜合癥、器官移植后感染、多發(fā)性硬化癥等多種疾病有關(guān)，但其

2、致病機(jī)理目前尚未清楚。 HHV－6基因組為一線性雙鏈DNA分子，大小約160～170Kbp，結(jié)構(gòu)上可分為3個(gè)部分，即序列獨(dú)特區(qū)(UL區(qū))，左右末端各有一個(gè)正向重復(fù)序列(DRL和DRR區(qū))，且有119個(gè)開(kāi)放讀碼框(ORF)。根據(jù)其基因結(jié)構(gòu)差異和抗原性可分為HHV-6A、B兩種亞型，GS、U1102是HHV-6A亞型代表株，而Z29是B亞型代表株，且序列的同源性在96％以上，HHV-6廣泛存在于健康成人及兒童外周血淋巴細(xì)胞和唾液中，

3、其原發(fā)感染一般發(fā)生在6個(gè)月～2歲的嬰幼兒，高峰期在6～9個(gè)月，其后在體內(nèi)建立持續(xù)性感染，并長(zhǎng)期呈潛伏感染。 我室于1994年在國(guó)內(nèi)首次分離鑒定出HHV－6南京地方株8株，并詳細(xì)研究了南京株E5(CN5)的病毒學(xué)、免疫學(xué)、生物學(xué)特性及病毒形態(tài)學(xué)超微結(jié)構(gòu)，為本次研究奠定了良好的基礎(chǔ)。 本研究采用蔗糖密度梯度離心法純化的南京株HHV-6 E5病毒抗原免疫8周齡、雌性BALB/c小鼠，采用常規(guī)方法融合，間接ELISA方法篩選，并

4、經(jīng)3次有限稀釋法亞克隆后，獲得3株能持續(xù)穩(wěn)定分泌特異性抗HHV-6抗體的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為JA9、JYE7、JYE8。將獲得的3株雜交瘤細(xì)胞株傳代擴(kuò)增，注射到用Pristane預(yù)刺激的BALB/c小鼠體內(nèi)制備腹水，并進(jìn)行初步純化。單抗Ig亞類鑒定表明：JA9為IgG1，κ亞型、JYE7和JYE8為IgM，λ亞型；腹水效價(jià)分別為1:0.8X105、1:0.256 X105、1:0.128 X105；雜交瘤細(xì)胞染色體計(jì)數(shù)顯示3株細(xì)胞染

5、色體數(shù)均約95條以上；間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示：3株單抗均能與HHV-6 E5感染的CBMCs呈陽(yáng)性反應(yīng)，而與未感染CBMCs呈陰性反應(yīng)；其中JA9單抗Western-blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步表明其可與HHV-6 E5約75ku大小的病毒蛋白結(jié)合。 本研究收集口腔腫瘤(口腔鱗癌及其癌前病變)、腦腫瘤(神經(jīng)膠質(zhì)瘤及腦膜瘤)、嬰幼兒急疹、免疫抑制劑使用者(腎移植及腎病綜合癥)及健康人群唾液標(biāo)本分別為41份、40份、36份、37份、40份，