人巨細(xì)胞病毒特異性CD8+T細(xì)胞在異基因造血干細(xì)胞移植受者中的免疫應(yīng)答.pdf

1、背景:
　　人巨細(xì)胞病毒(Human Cytomegalovirus，HCMV)在原發(fā)性感染免疫功能健全的人群后潛伏于骨髓系細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞。當(dāng)機(jī)體免疫功能受損時(shí)，潛伏的HCMV易發(fā)生激活，嚴(yán)重者可引起致死性肺炎、肝炎。尤其患者在異基因造血干細(xì)胞移植(Allogeneic Haematopoietic Stem Cell Transplantation，allo-HSCT)術(shù)后，HCMV激活是一種常見的并發(fā)癥。特異

2、性細(xì)胞免疫應(yīng)答尤其是CD8+T細(xì)胞對HCMV感染的控制和疾病的恢復(fù)起關(guān)鍵性作用。因此，評價(jià)allo-HSCT術(shù)后HCMV特異性CD8+T細(xì)胞的數(shù)量和功能狀態(tài)可能對于預(yù)防HCMV激活發(fā)揮重要作用，有助于闡明HCMV特異性T細(xì)胞免疫應(yīng)答機(jī)制。
　　方法和目的:
　　選擇2009年9月至2012年10月期間在我院行異基因造血干細(xì)胞移植HLA-A*0201受者21例。采集EDTA抗凝外周血標(biāo)本，移植后100天內(nèi)每周采集1次，100天

3、之后每月采集1次，共采集484份標(biāo)本。采用間接酶免疫組化法常規(guī)檢測外周血白細(xì)胞HCMV pp65抗原血癥;采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(Enzyme-linked Immunosorbent Assay, ELISA)檢測病人移植前HCMV特異性抗體IgG和IgM血清學(xué)狀態(tài);應(yīng)用HLA-肽五聚體染色技術(shù)定量測定HCMV pp65495-503特異性CD8+T細(xì)胞的水平;同時(shí)應(yīng)用IFN-γ酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)(Enzyme-linked Immuno

4、spot，ELISPOT)分析pp65495-503特異性CD8+T細(xì)胞的功能狀態(tài);從數(shù)量和功能上綜合評價(jià)異基因造血干細(xì)胞移植術(shù)后HCMV特異性CD8+T細(xì)胞在控制HCMV激活中的作用，進(jìn)而闡明HCMV特異性T細(xì)胞免疫應(yīng)答機(jī)理。
　　結(jié)果:
　　1.采集21例異基因造血干細(xì)胞移植HLA-A*0201患者的外周血標(biāo)本，抗原血癥陽性時(shí)pp65495-503特異性CD8+T細(xì)胞的絕對數(shù)的平均值是54.5/μl，抗原血癥陰性時(shí)pp6

5、5495-503特異性CD8+T細(xì)胞的絕對數(shù)的平均值是40.5/μl，兩組pp65495-503特異性CD8+T細(xì)胞的絕對數(shù)沒有明顯差異（p＞0.05）。
　　2.移植后90天，pp65495-503特異性CD8+T細(xì)胞維持在大于20/μl的水平。
　　3.抗原血癥陽性時(shí)分泌IFN-γ的T細(xì)胞的斑點(diǎn)數(shù)的平均值是507/2.5×105PBMCs，抗原血癥陰性時(shí)分泌IFN-γ的T細(xì)胞的斑點(diǎn)數(shù)的平均值是216/2.5×105PBM