半乳糖受體介導(dǎo)的MAP30對(duì)乙型肝炎病毒抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、乙型肝炎病毒是嗜肝雙鏈DNA病毒,病毒外膜與肝細(xì)胞膜融合進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),病毒基因組的復(fù)制過程需要經(jīng)過共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(covalently close circular DNA,ccc DNA)轉(zhuǎn)錄為前基因組RNA和若干種mRNA、前基因組RNA反轉(zhuǎn)錄負(fù)鏈DNA、以負(fù)鏈DNA為模板復(fù)制正鏈DNA、雙鏈DNA轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒靋ccDNA等幾個(gè)生物合成階段.MAP30(momordica anti-HIV protein of 30kD,MAP30

2、)是從葫蘆科植物苦瓜種子中純化的一種單鏈核糖體失活蛋白.該課題根據(jù)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞膜上存在有能專一識(shí)別和結(jié)合半乳糖基的特異性無唾液酸蛋白受體(asialoglycoprotein receptor, ASGP-R)這一特性,設(shè)想通過制備了Gal-ABH-MAP30交聯(lián)物,將MAP30特異性地導(dǎo)入肝細(xì)胞,并進(jìn)一步深入研究其體內(nèi)外抗HBV的活性.首先采用光化學(xué)法,以雙功能的交聯(lián)劑ABH(p-azidobenzoyl hydrazide,交聯(lián)劑)橋

3、梁,依次將半乳糖(galactose,Gal)和MAP30交聯(lián),構(gòu)建了Gal-ABH-MAP30交聯(lián)物,經(jīng)紫外掃描對(duì)照鑒定,證明Gal-ABH-MAP30中Gal-ABH是化學(xué)偶聯(lián).交聯(lián)率達(dá)86.2﹪.用氯胺T法將<'125>I標(biāo)記MAP30及Gal-ABH-MAP30,放射性示蹤觀察<'125>I-Gal-ABH-MAP30/<'125>I-MAP30在小鼠體內(nèi)的生物分布特性,顯示<'125>I-Gal-ABH-MAP30的肝濃聚水平

4、及速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于<'125>I-MAP30,<'125>I-Gal-ABH-MAP30在血液中的分布遠(yuǎn)小于<'125>I-MAP30,且具有肝靶向藥物在血液中的再分布特點(diǎn).將Gal-ABH-MAP30及MAP30,分別加入2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)液,結(jié)果表明,Gal-ABH-MAP30及MAP30對(duì)2.2.15細(xì)胞HBeAg的表達(dá)及HBV DNA合成均有抑制作用,其中Gal-ABH-MAP30作用強(qiáng),發(fā)生最大效應(yīng)的時(shí)間也較早.將半乳糖介導(dǎo)的藥