RGD序列肽在口腔癌中的作用機(jī)理研究.pdf

1、目的： 1、利用RGDV體外干預(yù)入舌鱗狀細(xì)胞癌腦轉(zhuǎn)移亞系Tb細(xì)胞系，探討RGDV對(duì)Tb細(xì)胞系增殖、凋亡的調(diào)控作用。 2、利用RGDV對(duì)金黃地鼠頰囊癌模型進(jìn)行靶向治療，探討RGDV在口腔自發(fā)成瘤體系中的作用。 方法： 1、RGDV對(duì)舌癌細(xì)胞增殖凋亡的研究 (1)通過(guò)RGDV作用于Tb細(xì)胞，采用MTT比色法、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)以及流式細(xì)胞儀細(xì)胞內(nèi)抗原檢測(cè)法檢測(cè)PCNA蛋白的表達(dá)，觀察RGDV對(duì)Tb細(xì)胞增

2、殖的影響。 (2)通過(guò)RGDV作用于Tb細(xì)胞系，采用FITC-AnnexinV/Pl檢測(cè)細(xì)胞凋亡、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期、Hoechst/PI雙染法觀察細(xì)胞形態(tài)、電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、DNA梯狀電泳以及流式細(xì)胞儀細(xì)胞內(nèi)抗原檢測(cè)法檢測(cè)Caspase-3蛋白的表達(dá)，觀察RGDV對(duì)Tb細(xì)胞凋亡的影影響。 2、RGDV對(duì)金黃地鼠頰囊癌靶向治療的研究建立金黃地鼠頰囊癌模型，利用RGDV對(duì)金黃地鼠頰囊癌模型進(jìn)行靶向治療，定期觀察地鼠頰囊

3、癌腫瘤體積變化，治療結(jié)束后取頰囊癌組織。常規(guī)包埋、切片,免疫組織化學(xué)法檢測(cè)治療后組織中v-WF、Brdu的表達(dá)變化。統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 結(jié)果： 1、RGDV對(duì)舌癌細(xì)胞增殖凋亡的研究 (1)RGDV對(duì)Tb細(xì)胞增殖的影響：RGDV干預(yù)組Tb細(xì)胞增殖速度低于Con組，克隆形成率明顯低于Con組(P<0.05)；PCNA表達(dá)水平明顯下調(diào)。 (2)RGDV對(duì)Tb細(xì)胞凋亡的影響：RGDV組的凋亡細(xì)胞發(fā)生率明顯增加，達(dá)

4、到88.3％與Con組相比有顯著性差異(P<4.05)；Tb細(xì)胞復(fù)制被阻滯在S期；DNA電泳顯示清晰的DNA Ladder：Hoechst/Pl雙染法觀察到明顯的凋亡細(xì)胞；Caspase-3蛋白的含量同Con組相比明顯增多。 2、RGDV對(duì)金黃地鼠頰囊癌靶向治療的研究 (1)利用RGDV對(duì)金黃地鼠頰囊癌模型進(jìn)行靶向治療后，腫瘤體積的變化結(jié)果：RGDV組地鼠腫瘤體積較Con組顯著縮小(P<0.05)。 (2)利用R

5、GDV對(duì)金黃地鼠頰囊癌模型進(jìn)行靶向治療后，v-WF的表達(dá)結(jié)果：RGDV組和Con組v-WF均有表達(dá)，分別檢測(cè)MVD(微血管密度)，RGDV組MVD值顯著低于Con組(P<0.05)。 (3)利用RGDV對(duì)金黃地鼠頰囊癌模型進(jìn)行靶向治療后， Brdu的表達(dá)結(jié)果：RGDV組和Con組Brdu均有表達(dá)，分剮檢測(cè)PI(增殖指數(shù))，RGDV組PI值顯著低于Con組(P<0.05)。 結(jié)論： 1、應(yīng)用RGDV干預(yù)Tb細(xì)胞后，

6、Tb細(xì)胞的增殖能力降低，提示RGDV抑制了Tb細(xì)胞的增殖能力； 2、應(yīng)用RGDV干預(yù)Tb細(xì)胞后，可誘導(dǎo)Tb細(xì)胞凋亡提示細(xì)胞凋亡途徑可能是RGDV影響腫瘤形成的重要途徑，并且RGDV可能通過(guò)CaspaSe-3信號(hào)通路誘導(dǎo)Tb細(xì)胞凋亡； 3、應(yīng)用RGDV作用金黃地鼠頰囊癌后，抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖，抑制了腫瘤的生長(zhǎng)。 4、應(yīng)用RGDV作用金黃地鼠頰囊癌后，降低了金黃地鼠頰囊癌的微血管密度，說(shuō)明RGDV對(duì)腫瘤新生血管起抑