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1、目的:探討重組脂聯(lián)素對(duì)第三丁基過(guò)氧化氫(t-BHP)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)凋亡是否存在影響,同時(shí)觀察重組脂聯(lián)素對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)信號(hào)通路IRE1α-JNK的影響。
方法:應(yīng)用不同濃度t-BHP(25、50、100、200、400μmol/L)誘導(dǎo)HUVECs1~24 h,MTT法觀察t-BHP作用后細(xì)胞的存活率;Hochest/PI染色熒光顯微鏡觀測(cè)細(xì)胞凋亡形態(tài);Western blot檢測(cè)t-BHP誘導(dǎo)HU
2、VECs凋亡過(guò)程中細(xì)胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)分子IRE1α、p-JNK及Caspase-3蛋白表達(dá)水平的變化。在此基礎(chǔ)上,用攜帶人脂聯(lián)素基因的重組腺病毒感染HUVECs處理,觀察重組脂聯(lián)素對(duì)t-BHP誘導(dǎo)的HUVECs凋亡是否有保護(hù)作用,以及細(xì)胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)信號(hào)分子IRE1α、p-JNK及Caspase-3蛋白表達(dá)水平的變化。
結(jié)果:MTT顯示,不同濃度t-BHP(25、50、100、200、400μmol/L)誘導(dǎo)HUVE
3、Cs1~24 h后,發(fā)現(xiàn)隨著t-BHP作用濃度的增加和時(shí)間的延長(zhǎng),可明顯抑制HUVECs的生長(zhǎng),并呈現(xiàn)一定的量效和時(shí)效關(guān)系。不同濃度t-BHP處理8 h后,Hochest/PI染色熒光顯微鏡下顯示,隨著t-BHP濃度的增加,HUVECs的損傷更明顯,細(xì)胞凋亡率隨之升高;ER應(yīng)激相關(guān)信號(hào)蛋白IRE1α、p-JNK及凋亡蛋白Caspase-3表達(dá)增加。采用攜帶人脂聯(lián)素基因的重組腺病毒感染HUVECs預(yù)處理,可以明顯減輕t-BHP誘導(dǎo)的HUV
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