脂聯(lián)素通過減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡抑制心肌細(xì)胞鈣化.pdf

1、第一部分，觀察不同濃度脂聯(lián)素對(duì)β-甘油磷酸鈉和丙酮酸鈉聯(lián)合誘導(dǎo)所致心肌細(xì)胞鈣化模型的影響
　　 目的：原代培養(yǎng)SD大鼠乳鼠心室肌細(xì)胞，β-甘油磷酸鈉和丙酮酸鈉聯(lián)合誘導(dǎo)制備心肌細(xì)胞鈣化模型，觀察不同濃度脂聯(lián)素對(duì)心肌細(xì)胞鈣化模型的影響。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)分組：1）空白對(duì)照組2）鈣化組3）脂聯(lián)素+鈣化組：脂聯(lián)素分別用不同濃度(3、10、20、30mg/L)與心肌細(xì)胞孵育48h，余同鈣化組。實(shí)驗(yàn)終止后，茜素紅S和VonKossa

2、染色法對(duì)鈣化心肌細(xì)胞進(jìn)行鑒定，通過細(xì)胞鈣含量、堿性磷酸酶活性和骨鈣素的測定，判斷鈣化程度。
　　 結(jié)果：倒置顯微鏡觀察：與空白對(duì)照組相比，隨著培養(yǎng)時(shí)間延長，單純鈣化組細(xì)胞內(nèi)顆粒增多，透明度下降，少數(shù)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)空泡，少量細(xì)胞脫落死亡，細(xì)胞層出現(xiàn)彌漫分布的點(diǎn)、片狀黑色沉淀物。(1)茜素紅S染色時(shí)，與對(duì)照組相比，鈣化組可見許多橘紅色深染區(qū)散在分布于細(xì)胞間，部分呈結(jié)節(jié)狀。(2)VonKossa染色時(shí)，與對(duì)照組相比，鈣化組可見細(xì)胞間散

3、在分布著許多黑色沉著區(qū)。單純心肌細(xì)胞鈣化后，鈣含量、堿性磷酸酶活性和骨鈣素分泌量顯著增加(P＜0.01)。用脂聯(lián)素進(jìn)行干預(yù)后，可較大程度地逆轉(zhuǎn)上述指標(biāo)變化，與心肌細(xì)胞鈣化組相比均具有顯著差異(P＜0.05)，并且呈現(xiàn)一定的濃度依賴性。
　　 結(jié)論：脂聯(lián)素可抑制β-甘油磷酸鈉和丙酮酸鈉聯(lián)合誘導(dǎo)所致的心肌細(xì)胞鈣化，脂聯(lián)素30mg/L的抑制作用最強(qiáng)。
　　 第二部分，探討脂聯(lián)素抑制心肌細(xì)胞鈣化的機(jī)制
　　 目的：原代培

4、養(yǎng)心肌細(xì)胞建立心肌細(xì)胞鈣化模型，給予不同濃度的脂聯(lián)素進(jìn)行干預(yù)，觀察脂聯(lián)素對(duì)鈣化心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmicreticulumstress，ERS)所致細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)分組：1）空白對(duì)照組2）鈣化組3）脂聯(lián)素+鈣化組。體外培養(yǎng)并誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞建立心肌細(xì)胞鈣化模型，用不同濃度的脂聯(lián)素(3、10、20、30mg/L)分別進(jìn)行干預(yù)。實(shí)驗(yàn)終止后，通過乳酸脫氫酶活性測定和流式細(xì)胞術(shù)檢測心肌細(xì)胞凋亡。用q

5、RT-PCR和Western-blot分別測定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激指標(biāo)葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)。
　　 結(jié)果：與空白對(duì)照組相比，鈣化組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激指標(biāo)葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12在mRNA水平和蛋白水平表達(dá)明顯增高；乳酸脫氫酶活性和細(xì)胞凋亡率顯著增加(P＜0.01)。用脂聯(lián)素進(jìn)行干預(yù)后，可較大程度地逆轉(zhuǎn)上述指標(biāo)變化，與心肌細(xì)胞鈣化組相比均具有顯著差異(P＜0.05)，并且呈