脂聯(lián)素通過減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡抑制心肌細胞鈣化.pdf

1、第一部分，觀察不同濃度脂聯(lián)素對β-甘油磷酸鈉和丙酮酸鈉聯(lián)合誘導(dǎo)所致心肌細胞鈣化模型的影響
　　 目的：原代培養(yǎng)SD大鼠乳鼠心室肌細胞，β-甘油磷酸鈉和丙酮酸鈉聯(lián)合誘導(dǎo)制備心肌細胞鈣化模型，觀察不同濃度脂聯(lián)素對心肌細胞鈣化模型的影響。
　　 方法：實驗分組：1）空白對照組2）鈣化組3）脂聯(lián)素+鈣化組：脂聯(lián)素分別用不同濃度(3、10、20、30mg/L)與心肌細胞孵育48h，余同鈣化組。實驗終止后，茜素紅S和VonKossa

2、染色法對鈣化心肌細胞進行鑒定，通過細胞鈣含量、堿性磷酸酶活性和骨鈣素的測定，判斷鈣化程度。
　　 結(jié)果：倒置顯微鏡觀察：與空白對照組相比，隨著培養(yǎng)時間延長，單純鈣化組細胞內(nèi)顆粒增多，透明度下降，少數(shù)細胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)空泡，少量細胞脫落死亡，細胞層出現(xiàn)彌漫分布的點、片狀黑色沉淀物。(1)茜素紅S染色時，與對照組相比，鈣化組可見許多橘紅色深染區(qū)散在分布于細胞間，部分呈結(jié)節(jié)狀。(2)VonKossa染色時，與對照組相比，鈣化組可見細胞間散

3、在分布著許多黑色沉著區(qū)。單純心肌細胞鈣化后，鈣含量、堿性磷酸酶活性和骨鈣素分泌量顯著增加(P＜0.01)。用脂聯(lián)素進行干預(yù)后，可較大程度地逆轉(zhuǎn)上述指標(biāo)變化，與心肌細胞鈣化組相比均具有顯著差異(P＜0.05)，并且呈現(xiàn)一定的濃度依賴性。
　　 結(jié)論：脂聯(lián)素可抑制β-甘油磷酸鈉和丙酮酸鈉聯(lián)合誘導(dǎo)所致的心肌細胞鈣化，脂聯(lián)素30mg/L的抑制作用最強。
　　 第二部分，探討脂聯(lián)素抑制心肌細胞鈣化的機制
　　 目的：原代培

4、養(yǎng)心肌細胞建立心肌細胞鈣化模型，給予不同濃度的脂聯(lián)素進行干預(yù)，觀察脂聯(lián)素對鈣化心肌細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmicreticulumstress，ERS)所致細胞損傷的保護作用。
　　 方法：實驗分組：1）空白對照組2）鈣化組3）脂聯(lián)素+鈣化組。體外培養(yǎng)并誘導(dǎo)乳鼠心肌細胞建立心肌細胞鈣化模型，用不同濃度的脂聯(lián)素(3、10、20、30mg/L)分別進行干預(yù)。實驗終止后，通過乳酸脫氫酶活性測定和流式細胞術(shù)檢測心肌細胞凋亡。用q

5、RT-PCR和Western-blot分別測定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激指標(biāo)葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12mRNA水平和蛋白水平的表達。
　　 結(jié)果：與空白對照組相比，鈣化組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激指標(biāo)葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12在mRNA水平和蛋白水平表達明顯增高；乳酸脫氫酶活性和細胞凋亡率顯著增加(P＜0.01)。用脂聯(lián)素進行干預(yù)后，可較大程度地逆轉(zhuǎn)上述指標(biāo)變化，與心肌細胞鈣化組相比均具有顯著差異(P＜0.05)，并且呈