凡納濱對(duì)蝦群體的ISSR分析及抗病力指標(biāo)的比較.pdf

1、應(yīng)用ISSR標(biāo)記對(duì)6個(gè)養(yǎng)殖群體的凡納濱對(duì)蝦的遺傳多態(tài)性和親緣關(guān)系進(jìn)行分析，比較群體間、群體內(nèi)的遺傳差異。通過人工浸泡感染W(wǎng)SSV，比較分析6個(gè)養(yǎng)殖群體的凡納濱對(duì)蝦的累計(jì)死亡率、抗病力免疫指標(biāo)變化(血細(xì)胞密度THC、血細(xì)胞酚氧化酶PO活力、血清蛋白質(zhì)含量、一氧化氮合酶)，以期了解這6個(gè)養(yǎng)殖群體對(duì)蝦對(duì)WSSV敏感性差異。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及結(jié)果如下： 以凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei)的基因組DNA制備ISSR-PCR模

2、板。采用單因素分析結(jié)合正交優(yōu)化方法，對(duì)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)體系中模板DNA濃度、Mg2+濃度、dNTP的用量、Taq酶的含量以及退火溫度梯度進(jìn)行試驗(yàn)，篩選出清晰、多態(tài)性高可重復(fù)性好的ISSR引物的PCR反應(yīng)條件。用100個(gè)ISSR引物進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，篩選出效果較好的15個(gè)引物。 應(yīng)用微衛(wèi)星間隔序列擴(kuò)增多態(tài)性DNA(ISSR)標(biāo)記技術(shù)對(duì)凡納濱對(duì)蝦6個(gè)不同養(yǎng)殖群體遺傳多樣性和遺傳分化進(jìn)行研究。篩選出15種SSR引物對(duì)180個(gè)個(gè)

3、體進(jìn)行檢測(cè)，應(yīng)用POPGENE軟件和MEGA軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行處理。結(jié)果共得到212個(gè)可重復(fù)的位點(diǎn)，其中多態(tài)位點(diǎn)185個(gè)，多態(tài)百分率為87.26％。各群體的多態(tài)位點(diǎn)百分率(PPB)為64.15％-68.40％,平均為66.26％。國(guó)聯(lián)群體最高，其次是886群體和學(xué)生自制群體，最低是李小飛群體。Shannon指數(shù)和Nei指數(shù)均反映出對(duì)蝦各群體群具有較高的遺傳多樣性。Shannon指數(shù)為0.4433，各群體Shannon指數(shù)在0.3681～0.

4、3817之間,Nei指數(shù)為0.2953,各群體Nei指數(shù)在0.2487～0.2619之間。運(yùn)用POPGENE得出群體內(nèi)遺傳變異(86.00％)大于群體間(14.00％)的結(jié)論。群體間的遺傳分化系數(shù)為0.1400。對(duì)蝦群體間的基因流為3.0713，遺傳相似度平均為0.9340,遺傳距離平均為0.0660。根據(jù)遺傳距離聚類分析，應(yīng)用MEGA軟件得出遺傳發(fā)生樹。這6個(gè)群體明顯分為兩大支，李小飛群體和886群體之間的遺傳距離最小，親緣關(guān)系最近，

5、首先聚在一起，旺意群體和國(guó)聯(lián)群體兩群體聚在一起后，又與陳子騰群體聚為在一起；這三個(gè)群體然后與學(xué)生自制群體聚在一起，最后才與群體李小飛群體和886群體聚在一起。 浸泡感染W(wǎng)SSV后測(cè)定各群體的凡納濱對(duì)蝦累積死亡率和感染W(wǎng)SSV過程中對(duì)蝦在不同時(shí)間點(diǎn)的免疫學(xué)因子(THC、、血漿蛋白含量、血細(xì)胞總PO活力NOS活力等)的變化，結(jié)果得到：6個(gè)不同養(yǎng)殖群體對(duì)蝦的死亡率從20％～62.5％。各個(gè)群體的對(duì)蝦的免疫指標(biāo)變化整體上趨于一致的同時(shí)也