凡納濱對蝦群體的ISSR分析及抗病力指標的比較.pdf

1、應(yīng)用ISSR標記對6個養(yǎng)殖群體的凡納濱對蝦的遺傳多態(tài)性和親緣關(guān)系進行分析，比較群體間、群體內(nèi)的遺傳差異。通過人工浸泡感染W(wǎng)SSV，比較分析6個養(yǎng)殖群體的凡納濱對蝦的累計死亡率、抗病力免疫指標變化(血細胞密度THC、血細胞酚氧化酶PO活力、血清蛋白質(zhì)含量、一氧化氮合酶)，以期了解這6個養(yǎng)殖群體對蝦對WSSV敏感性差異。實驗內(nèi)容及結(jié)果如下： 以凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei)的基因組DNA制備ISSR-PCR模

2、板。采用單因素分析結(jié)合正交優(yōu)化方法，對聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)體系中模板DNA濃度、Mg2+濃度、dNTP的用量、Taq酶的含量以及退火溫度梯度進行試驗，篩選出清晰、多態(tài)性高可重復(fù)性好的ISSR引物的PCR反應(yīng)條件。用100個ISSR引物進行了PCR擴增，篩選出效果較好的15個引物。 應(yīng)用微衛(wèi)星間隔序列擴增多態(tài)性DNA(ISSR)標記技術(shù)對凡納濱對蝦6個不同養(yǎng)殖群體遺傳多樣性和遺傳分化進行研究。篩選出15種SSR引物對180個個

3、體進行檢測，應(yīng)用POPGENE軟件和MEGA軟件對結(jié)果進行處理。結(jié)果共得到212個可重復(fù)的位點，其中多態(tài)位點185個，多態(tài)百分率為87.26％。各群體的多態(tài)位點百分率(PPB)為64.15％-68.40％,平均為66.26％。國聯(lián)群體最高，其次是886群體和學(xué)生自制群體，最低是李小飛群體。Shannon指數(shù)和Nei指數(shù)均反映出對蝦各群體群具有較高的遺傳多樣性。Shannon指數(shù)為0.4433，各群體Shannon指數(shù)在0.3681～0.

4、3817之間,Nei指數(shù)為0.2953,各群體Nei指數(shù)在0.2487～0.2619之間。運用POPGENE得出群體內(nèi)遺傳變異(86.00％)大于群體間(14.00％)的結(jié)論。群體間的遺傳分化系數(shù)為0.1400。對蝦群體間的基因流為3.0713，遺傳相似度平均為0.9340,遺傳距離平均為0.0660。根據(jù)遺傳距離聚類分析，應(yīng)用MEGA軟件得出遺傳發(fā)生樹。這6個群體明顯分為兩大支，李小飛群體和886群體之間的遺傳距離最小，親緣關(guān)系最近，

5、首先聚在一起，旺意群體和國聯(lián)群體兩群體聚在一起后，又與陳子騰群體聚為在一起；這三個群體然后與學(xué)生自制群體聚在一起，最后才與群體李小飛群體和886群體聚在一起。 浸泡感染W(wǎng)SSV后測定各群體的凡納濱對蝦累積死亡率和感染W(wǎng)SSV過程中對蝦在不同時間點的免疫學(xué)因子(THC、、血漿蛋白含量、血細胞總PO活力NOS活力等)的變化，結(jié)果得到：6個不同養(yǎng)殖群體對蝦的死亡率從20％～62.5％。各個群體的對蝦的免疫指標變化整體上趨于一致的同時也