凡納濱對(duì)蝦引進(jìn)群體分子系譜構(gòu)建及中國(guó)對(duì)蝦分子標(biāo)志家系放流效果評(píng)估.pdf

1、凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）又稱(chēng)南美白對(duì)蝦，是我國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的主要養(yǎng)殖品種，原產(chǎn)中南美洲太平洋沿岸水域。凡納濱對(duì)蝦的選擇育種工作已經(jīng)在過(guò)去的數(shù)十年中展開(kāi)。基于龐大的養(yǎng)殖規(guī)模，親蝦需求量較大。若采用養(yǎng)殖的對(duì)蝦作為親本，會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的近親繁殖，導(dǎo)致重要性狀的衰退，需要從不同的公司引進(jìn)更多的群體來(lái)擴(kuò)大親本數(shù)量。但是從國(guó)外引進(jìn)親蝦的系譜不清，造成親緣關(guān)系未知，因此急需對(duì)引進(jìn)群體進(jìn)行詳細(xì)的遺傳多樣性和遺傳分化分析。

2、>　　中國(guó)對(duì)蝦（Fenneropenaeus chinensis）主要分布于我國(guó)北方沿海及朝鮮半島西海岸，是我國(guó)重要海水養(yǎng)殖蝦類(lèi)。由于過(guò)度捕撈、環(huán)境污染以及管理不善等諸多人為因素的影響，中國(guó)對(duì)蝦野生資源量萎縮嚴(yán)重。漁業(yè)增殖放流可以有效恢復(fù)漁業(yè)資源，現(xiàn)已應(yīng)用在多個(gè)水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)物種中。由于種種原因，尤其是受限于回捕漁獲中增殖放流與野生個(gè)體數(shù)量的精確估算，現(xiàn)有增殖放流效果評(píng)估方法一直未能對(duì)中國(guó)對(duì)蝦放流回捕率作出理想的評(píng)估。利用攜帶特定微衛(wèi)星分子指

3、紋圖譜的中國(guó)對(duì)蝦家系，作為“內(nèi)標(biāo)”按照一定比例摻入到放流群體中，在回捕漁獲中，通過(guò)特定“內(nèi)標(biāo)”家系個(gè)體識(shí)別及家系溯源從而準(zhǔn)確推算放流回捕率，實(shí)現(xiàn)對(duì)放流回捕率的精確計(jì)算。
　　本研究的目的在于：1）凡納濱對(duì)蝦引進(jìn)群體分子親緣關(guān)系計(jì)算及系譜重建；2）分子標(biāo)志家系對(duì)中國(guó)對(duì)蝦資源增殖放流效果評(píng)估在膠州灣及渤海灣（漢沽）的試點(diǎn)。具體研究結(jié)果報(bào)道如下：
　　利用7對(duì)微衛(wèi)星引物評(píng)估7個(gè)凡納濱對(duì)蝦引進(jìn)群體共192尾個(gè)體的遺傳多樣性和遺傳分化

4、水平。結(jié)果表明，7對(duì)引物共獲得的等位基因109個(gè)，分別從4～21個(gè)不等，有效等位基因數(shù)為2.7～14.6；各位點(diǎn)的平均觀測(cè)雜合度(Ho)為0.318～0.949，平均期望雜合度（He）為0.636～0.956；平均多態(tài)信息含量(PIC)為0.593～0.952，說(shuō)明各位點(diǎn)在7個(gè)凡納濱對(duì)蝦引進(jìn)群體內(nèi)均表現(xiàn)出較高的遺傳多樣性水平。49個(gè)群體位點(diǎn)中的37出現(xiàn)了不同程度的Hardy-Weinberg平衡偏離。對(duì)7個(gè)群體間的遺傳分化水平進(jìn)行檢測(cè)，

5、得到近交系數(shù)Fis在5個(gè)多態(tài)位點(diǎn)均為正值，兩兩群體間的固定指數(shù)Fst值在0.0225～0.1510之間。Fst顯著性檢驗(yàn)表明，各群體之間的遺傳分化不顯著。分子方差分析（AMOVA）結(jié)果顯示，大部分遺傳變異(88.7％)來(lái)自于群體內(nèi)，來(lái)自于群體間個(gè)體內(nèi)的遺傳變異(11.3%)較小。群體間遺傳相似性系數(shù)、遺傳距離及聚類(lèi)分析表明，UA1和UA2親緣關(guān)系最近。7個(gè)引進(jìn)群體具有豐富的遺傳多樣性和中度的遺傳分化，適合作為大規(guī)模家系育種的基礎(chǔ)群體。<

6、br>　　在增殖放流回捕的中國(guó)對(duì)蝦漁獲中，膠州灣海域共回捕2507尾，渤海灣（漢沽）海域共回捕3232尾。利用實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)開(kāi)發(fā)的兩組中國(guó)對(duì)蝦熒光標(biāo)記微衛(wèi)星四重PCR反應(yīng)體系（按照最佳退火溫度，分別命名為高溫組和低溫組），檢測(cè)回捕個(gè)體基因型，結(jié)合Cervus3.0軟件和父母本基因型信息，對(duì)回捕個(gè)體進(jìn)行分子識(shí)別。首先利用低溫組四重PCR反應(yīng)體系對(duì)膠州灣回捕個(gè)體進(jìn)行分型，確定回捕“內(nèi)標(biāo)”個(gè)體，再利用高溫組四重PCR反應(yīng)體系對(duì)回捕“內(nèi)標(biāo)”個(gè)體進(jìn)行

7、確認(rèn)。最終在膠州灣2507尾回捕樣品中，檢測(cè)到來(lái)自于4個(gè)家系的8尾個(gè)體。渤海灣（漢沽）海域的回捕個(gè)體采用相似的方法，但先用高溫組四重PCR反應(yīng)體系檢測(cè)，再利用低溫組進(jìn)行確認(rèn)。最終，在渤海灣3232尾回捕樣品中，檢測(cè)到來(lái)自于3個(gè)家系的4尾個(gè)體。結(jié)合兩地2012年度的中國(guó)對(duì)蝦放流數(shù)量，推算膠州灣2507尾回捕樣品中，增殖放流個(gè)體數(shù)量為2400尾，野生個(gè)體數(shù)量為107尾；推算渤海灣（漢沽）3232尾回捕樣品中，增殖放流個(gè)體數(shù)量為3137尾，野