駱駝蓬總堿致突變性實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：①通過(guò)高效液相色譜法（HPLC）檢測(cè)駱駝蓬總堿中去氫駱駝蓬堿的含量，以作為總堿提取的質(zhì)控指標(biāo)。②通過(guò)鼠傷寒沙門氏菌營(yíng)養(yǎng)缺陷型回復(fù)突變?cè)囼?yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)和小鼠精子致畸試驗(yàn)，觀測(cè)駱駝蓬總堿的致突變性反應(yīng)，對(duì)駱駝蓬總堿的致突變性毒性反應(yīng)發(fā)生的危害程度進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)，為擬開發(fā)抗消化系統(tǒng)惡性腫瘤的新藥駱駝蓬總堿提供安全用藥劑量的參考范圍。
　　 方法：⑴駱駝蓬總堿中去氫駱駝蓬堿的含量測(cè)定：通過(guò)高效液相（HPLC）色譜

2、法，檢測(cè)駱駝蓬總堿中去氫駱駝蓬堿的含量。色譜柱：十八烷基硅烷硅膠填充柱；流動(dòng)相：甲醇-0.01 mol·L-1硫酸銨溶液-二乙胺(60∶40∶0.4)；檢測(cè)波長(zhǎng)320 nm。⑵致突變?cè)囼?yàn)：鼠傷寒沙門氏菌營(yíng)養(yǎng)缺陷型回復(fù)突變?cè)囼?yàn)(Ames試驗(yàn)) ：采用平板摻入法，設(shè)4個(gè)劑量組分別為40、200、1000、5000μg/皿，溶劑為二甲基亞砜，同時(shí)設(shè)有陽(yáng)性物對(duì)照組、溶劑對(duì)照組和未處理對(duì)照組，均包括加S-9和不加S-9兩種情況；小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)

3、胞微核試驗(yàn)：通過(guò)對(duì)昆明種小鼠灌胃給藥229.68、114.84、57.42mg/kg三個(gè)劑量的駱駝蓬總堿混懸液，觀察駱駝蓬總堿對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞的致突變作用及細(xì)胞毒性反應(yīng)；小鼠精子致畸試驗(yàn)：通過(guò)對(duì)昆明種雄性小鼠灌胃給藥574.21、287.11、143.55mg/kg三個(gè)劑量的駱駝蓬總堿混懸液，觀察駱駝蓬總堿對(duì)小鼠精子的致突變作用。
　　 結(jié)果：①駱駝蓬總堿中去氫駱駝蓬堿的含量測(cè)定：所測(cè)駱駝蓬總堿中去氫駱駝蓬堿的含量為10.88％；

4、駱駝蓬種子中去氫駱駝蓬堿的含量為3.64％。②致突變?cè)囼?yàn)：鼠傷寒沙門氏菌營(yíng)養(yǎng)缺陷型回復(fù)突變?cè)囼?yàn)(Ames試驗(yàn)) ：各組在加與不加S-9的情況下，其回變菌落數(shù)均未超過(guò)其自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍；小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)：駱駝蓬總堿各劑量組內(nèi)雌、雄小鼠的骨髓細(xì)胞微核發(fā)生率均在正常范圍內(nèi)，且未見有劑量依賴性關(guān)系，嗜多染紅細(xì)胞/成熟紅細(xì)胞（PCE/NCE）的比值也在正常值范圍之內(nèi)。駱駝蓬總堿三個(gè)劑量組對(duì)小鼠骨髓微核率的影響，與對(duì)照組比較差異無(wú)顯

5、著性意義（P>0.05）；小鼠精子致畸試驗(yàn)：駱駝蓬總堿各劑量組的精子畸形率均在正常范圍之內(nèi)，且未見有劑量依賴性關(guān)系。駱駝蓬總堿三個(gè)劑量組對(duì)精子畸形率的影響與對(duì)照組比較差異亦無(wú)顯著性意義（P>0.05）。
　　 結(jié)論：⑴駱駝蓬總堿中去氫駱駝蓬堿的含量為10.88％；駱駝蓬種子中去氫駱駝蓬堿的含量為3.64％。本實(shí)驗(yàn)所測(cè)駱駝蓬總堿中去氫駱駝蓬堿的含量與文獻(xiàn)報(bào)道基本相符。⑵在本實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)駱駝蓬總堿所進(jìn)行的致突變?cè)囼?yàn)各項(xiàng)觀測(cè)指標(biāo)檢測(cè)