復方駱駝蓬子軟膏質量標準及其新型親水性凝膠劑的研究.pdf

1、目的：提高上市產品復方駱駝蓬子軟膏的質量標準。研究秋水仙、天仙子藥材的主要有效成分的質控方法。同時，在研究駱駝蓬子、秋水仙、天仙子藥材生物堿有效組分的基礎上，開展復方駱駝蓬子生物堿有效組分的親水性組分配伍凝膠劑的研究，為復方駱駝蓬子軟膏的新劑型研究和二次開發(fā)奠定基礎。
　　方法:采用硅膠HSGF254薄層板，以乙酸乙酯-甲醇-氨水(17:2:1)為展開劑，以碘化鉍鉀試液和0.8 mol/L亞硝酸鈉溶液為顯色劑，分別以駱駝蓬堿、去氫

2、駱駝蓬堿、鴨嘴花堿、東莨菪堿、阿托品和秋水仙堿等活性生物堿類成分為指標，分別對復方中的駱駝蓬子、天仙子和秋水仙藥材進行定性鑒別。采用Boston LunaC18(150mm×4.6 mm,5μm)為色譜柱，以乙腈-醋酸銨緩沖液(3.4 g乙酸銨＋3 mL冰乙酸＋500 mL水)為流動相梯度洗脫，檢測波長265 nm，對復方駱駝蓬子軟膏中活性成分鴨嘴花堿、駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿進行含量測定，初步完善復方駱駝蓬子軟膏的質量標準。采用 Sym

3、metrix ODS-H色譜柱，以乙腈-0.1％三氟乙酸水(28:72)為流動相，檢測波長350 nm，以1.0 mL/min的流速對秋水仙藥材中秋水仙堿的含量進行定量測定。采用 Symmetrix ODS-H色譜柱，以乙腈-0.1%三氟乙酸水(14∶86)為流動相，檢測波長210 nm，流速1.0 mL/min，測定天仙子藥材中東莨菪堿和莨菪堿的含量。以秋水仙堿、東莨菪堿、莨菪堿的吸附量和解吸率為考察指標，采用大孔樹脂分離純化秋水仙、

4、天仙子總生物堿有效組分。分別考察秋水仙堿，東莨菪堿、莨菪堿在5種不同類型的大孔吸附樹脂(LSA5B、LSA21、LSD001、HPD600、D101)上的吸附和解吸附行為，并分別考察藥液pH值、吸附流速、洗脫流速等參數(shù)對秋水仙藥材中的秋水仙堿，天仙子藥材中東莨菪堿、莨菪堿等生物堿的吸附和洗脫效果的影響，最大程度地富集秋水仙和天仙子中的生物堿有效組分。在前期駱駝蓬子生物堿有效組分研究的基礎上，依據(jù)復方組分配伍原理，以駱駝蓬子、天仙子、秋水

5、仙生物堿有效組分為原料制備復方駱駝蓬子親水性組分配伍凝膠劑。以駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的經皮累積滲透量為指標，對基質卡波姆濃度、促滲劑氮酮濃度、保濕劑甘油的用量、潛溶劑丙二醇的用量和pH調節(jié)劑三乙醇胺的用量等因素進行考察。在單因素試驗的基礎上，選擇對復方駱駝蓬子親水性組分配伍凝膠劑經皮滲透性影響較顯著的因素作為考察對象，采用星點設計-效應面法對凝膠劑進行處方工藝篩選。根據(jù)4h內駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的經皮累積滲透量之和建立最佳數(shù)學模型并描

6、繪效應面，對復方駱駝蓬子親水性組分配伍凝膠劑的處方工藝進行優(yōu)化。
　　結果:以駱駝蓬堿、去氫駱駝蓬堿、鴨嘴花堿、東莨菪堿、阿托品和秋水仙堿等活性生物堿類成分為指標建立的TLC方法能有效地對復方駱駝蓬子軟膏中駱駝蓬子、天仙子和秋水仙等3味藥材進行定性鑒別。以鴨嘴花堿、駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿為指標建立的高效液相色譜法能快速的測定復方駱駝蓬子軟膏中生物堿類活性成分的含量。方法學考察表明鴨嘴花堿、駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的線性范圍1.005

7、6～201.12μg/mL(r=0.9998)、1.0016～200.32μg/mL(r=0.9998)和0.8599~171.99μg/mL(r=0.9996)，平均回收率分別為98.12%，97.13%和98.29%，方法的日內日間精密度RSD值均小于2%。測定3批復方駱駝蓬子軟膏中鴨嘴花堿、駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的含量分別為0.17%~0.34%、0.27%~1.23%和0.77%~1.17%。但同一批制劑的含量測定結果偏差較大，

8、說明制劑復方駱駝蓬子軟膏的質量均一性存在問題，有待解決。以秋水仙堿為指標成分建立的秋水仙藥材的HPLC含量測定方法能有效地控制秋水仙藥材的質量。方法學考察表明秋水仙堿在2.5~160.0μg/mL范圍內的線性關系良好(r=0.9999)，平均回收率為96.57%，RSD=0.95%。7批不同產地秋水仙藥材中秋水仙堿的含量在0.02%~0.13%波動，進口藥材中秋水仙堿的含量與國產藥材中秋水仙堿含量差異較大，原因有待于進一步研究。以氫溴酸

9、東莨菪堿和硫酸阿托品為指標成分建立的天仙子藥材的HPLC含量測定方法能快速、簡便的控制天仙子藥材的質量。方法學考察表明氫溴酸東莨菪堿和硫酸阿托品的線性范圍分別為4.02～513.64μg/mL(r=0.9999)和4.00~512.00μg/mL(r=0.9998)，平均回收率分別為98.41%和98.79%。測定的3批天仙子藥材中東莨菪堿(以氫溴酸東莨菪堿計)和莨菪堿(以硫酸阿托品計)的含量分別為0.01%和0.02%。天仙子藥材中托

10、烷類生物堿的含量較低。采用大孔吸附樹脂技術能顯著的分離純化秋水仙、天仙子總生物堿的有效組分。通過比較秋水仙堿，東莨菪堿和莨菪堿在5種不同孔徑、比表面積、極性的大孔吸附樹脂上的吸附行為，以弱極性的LSA5B型大孔吸附樹脂對秋水仙堿，東莨菪堿、莨菪堿均有較好的富集能力。秋水仙藥材中秋水仙堿在LSA5B型大孔吸附樹脂上的最佳富集工藝條件為：吸附上樣液的pH值為2.5，上樣流速為1.5 BV/h，秋水仙堿飽和吸附量為26.49 mg/g，8 B

11、V蒸餾水洗去水溶性雜質，最佳的洗脫溶劑為體積分數(shù)為70%乙醇，最佳洗脫流速為1.5 BV/h，洗脫用量為20 BV，秋水仙堿的洗脫率達98%。天仙子藥材中托烷類生物堿在LSA5B型大孔吸附樹脂上的最佳富集工藝條件為：以1.5 BV/h的流速上樣，東莨菪堿和莨菪堿的飽和吸附量分別為2.835 mg/g、4.947 mg/g，4 BV蒸餾水洗去水溶性雜質，最佳的洗脫溶劑為體積分數(shù)為50%乙醇，最佳洗脫流速為1.5 BV/h，洗脫用量為10

12、BV，東莨菪堿和莨菪堿的洗脫率可達74%和86%。在確定的最佳大孔樹脂吸附工藝條件下，得到秋水仙堿含量為11.55%的秋水仙總生物堿有效組分和東莨菪堿、莨菪堿含量為1.84%、4.02%的天仙子總生物堿有效組分。在單因素試驗的基礎上，考察了卡波姆濃度、氮酮濃度和三乙醇胺用量這3個對凝膠劑的經皮滲透性有顯著性影響的因素，每個因素選取5個水平，以駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的經皮累積滲透量為指標，通過星點設計-效應面法優(yōu)化得到復方駱駝蓬子親水性組

13、分配伍凝膠劑的最優(yōu)處方：卡波姆934為1.00%、氮酮為1.50%，三乙醇胺為2.00%。經3批驗證實驗證明優(yōu)化的凝膠劑其駱駝蓬堿、去氫駱駝蓬堿的經皮累積滲透量的實際值與預測值相近，相對偏差小于5%。通過星點設計-效應面法的擬合方程可以很好的預測各因素和評價指標之間的關系。
　　結論：建立的定性定量方法快速、簡便、靈敏、精準、穩(wěn)定,為秋水仙和天仙子藥材及復方駱駝蓬子軟膏的質量標準的制定和質量控制提供了依據(jù)，為復方駱駝蓬子軟膏質量標

14、準的完善和提高奠定了基礎。LSA5B型大孔吸附樹脂對秋水仙、天仙子總生物堿分離純化效果好，富集能力強。在確定的工藝條件下，LSA5B型大孔吸附樹脂富集制備的秋水仙的生物堿有效組分中秋水仙堿的含量比富集前提高了25倍，天仙子中生物堿有效組分中生物堿的含量比富集前提高了18倍。通過星點設計所建立的模型預測性良好，可用于預測和優(yōu)化復方駱駝蓬子親水性組分配伍凝膠劑處方。以卡波姆為基質制備的凝膠劑外觀透明美觀、細膩滑爽、質量均一、黏性小、易清洗,