養(yǎng)殖刺參（Apostichopus japonicus）腐皮綜合癥的發(fā)生與異養(yǎng)菌區(qū)系間的關系.pdf

1、隨著北方沿海刺參(Apostichops japonicus)養(yǎng)殖的興起和養(yǎng)殖規(guī)模的日益擴大，在刺參越冬保苗和養(yǎng)成階段普遍發(fā)生腐皮綜合癥疾病，導致極高死亡率和嚴重經(jīng)濟損失。該病主要癥狀表現(xiàn)為：腫嘴、搖頭、排臟、身體萎縮、體表潰爛，解體死亡；其傳染性強、發(fā)病快、流行性廣，嚴重制約了刺參的健康養(yǎng)殖和可持續(xù)發(fā)展。 目前，關于養(yǎng)殖刺參病害的研究主要集中在疾病的流行病學、病原學以及組織病理學等，而疾病的發(fā)生機理特別是疾病發(fā)生的環(huán)境微生態(tài)學

2、特征則未曾見到報道。為了掌握刺參腐皮綜合癥發(fā)生早期水體的水質(zhì)狀況、揭示發(fā)病早期病原菌與養(yǎng)殖環(huán)境中異養(yǎng)菌區(qū)系問的關系，闡明刺參腐皮綜合癥發(fā)生的根源，本文在對青島周邊不同地區(qū)三處刺參養(yǎng)殖場進行長期監(jiān)測跟蹤的基礎上，首次報道了養(yǎng)殖刺參在低溫養(yǎng)殖期間以及渡夏期間刺參腐皮綜合癥發(fā)生早期養(yǎng)殖水體水質(zhì)、池塘中細菌數(shù)量與分布特征以及池塘水體、底泥、刺參腸道中優(yōu)勢菌與刺參病灶組織優(yōu)勢菌之間的相關性，并對該病原進行了鑒定。 2006年1月～5月刺參

3、低溫養(yǎng)殖期間，在青島周邊不同地區(qū)三處刺參養(yǎng)殖場刺參腐皮綜合癥發(fā)生的早期，對正常及發(fā)病池塘的水質(zhì)、池塘中異養(yǎng)菌總數(shù)和弧菌總數(shù)的數(shù)量與分布以及刺參腸道中異養(yǎng)菌總數(shù)和弧菌總數(shù)進行了研究。同時，比較分析了發(fā)病早期發(fā)病池塘水體、表層底泥、刺參腸道中優(yōu)勢菌與刺參病灶組織優(yōu)勢菌之間的相關性。此外，對刺參病灶組織分離的優(yōu)勢菌060102A、060330B進行了人工感染試驗證實其為刺參腐皮綜合癥的致病原并進行了分類鑒定。水質(zhì)監(jiān)測內(nèi)容包括：溫度(T)、鹽度

4、(S)、pH、溶解氧(DO)、化學需氧量(COD)、氨氮(NH<,4><'+>-N)和亞硝酸氮(NO<,2><'->-N)。結果表明：發(fā)病池塘水體水溫和溶氧形成分層，底層水體逐漸惡化；底層水體異養(yǎng)菌總數(shù)和弧菌總數(shù)普遍高于表層，但整個池水細菌數(shù)量相對較低；池塘表層底泥與刺參腸道中異養(yǎng)菌總數(shù)較大，弧菌總數(shù)較低，其優(yōu)勢菌落與刺參病灶組織分離的優(yōu)勢菌具有一致性，與水體中優(yōu)勢菌相關不大。通過形態(tài)學觀察、API半自動化鑒定、常規(guī)生理生化試驗以及16

5、S rRNA基因序列同源性分析等表明，060102A為假交替單胞菌屬細(Pseudoalteromonas sp.)：060330B具有假單胞菌屬的特征，其表型特征與惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)相似，親緣關系與惡臭假單胞菌最近，相似率達到99.5％。菌株060330B被鑒定為惡臭假單胞菌，并視為養(yǎng)殖刺參腐皮綜合癥的致病原之一。通過對多起不同來源患病刺參的調(diào)查研究表明，使用年限長、淤泥層厚呈黑色并伴有異味的養(yǎng)殖池塘

6、在該時期容易導斂刺參腐皮綜合癥的發(fā)生，刺參腐皮綜合癥的發(fā)生與池塘水體分層引起的水質(zhì)惡化和底泥中病原菌數(shù)量密切相關。 2006年7月～10月養(yǎng)殖刺參渡夏期間，在青島周邊不同地區(qū)三處刺參養(yǎng)殖場刺參腐皮綜合癥發(fā)生的早期，對發(fā)病池塘的水質(zhì)、池塘中異養(yǎng)菌總數(shù)和弧菌總數(shù)的數(shù)量與分布以及刺參腸道中的異養(yǎng)菌總數(shù)和弧菌總數(shù)進行了研究。同時，比較分析了發(fā)病早期池塘水體、表層底泥、刺參腸道中優(yōu)勢菌與刺參病灶組織優(yōu)勢菌之間的相關性。此外，對刺參病灶組織分離的優(yōu)

7、勢菌060904E進行了人工感染試驗證實其為刺參腐皮綜合癥的致病原并進行了分類鑒定。水質(zhì)監(jiān)測內(nèi)容包括：溫度(T)、鹽度(S)、pH、溶解氧(DO)、化學需氧量(COD)、氨氮(NH<,4><'+>-N)和亞硝酸氮(NO<,2><'->-N)。結果表明：整個養(yǎng)殖池塘水體出現(xiàn)了不同程度惡化，水體中異養(yǎng)菌總數(shù)與弧菌總數(shù)平均分別達到3.3×10<'4>cfu/mL、2.0×10<'4>cfu/mL，水層差異不大；池塘表層底泥中異養(yǎng)菌總數(shù)和弧菌總

8、數(shù)平均分別為5.9×10<'6>cfu/g、1.4×10<'6>cfu/g，弧菌數(shù)量處于較高水平；刺參腸道中異養(yǎng)菌總數(shù)和弧菌總數(shù)平均分別為5.8×10<'6>cfu/g、1.9×10<'6>cfu/g，弧菌數(shù)量也處于較高水平；池塘水體、底泥以及刺參腸道中分離出的優(yōu)勢菌與刺參病灶組織分離的優(yōu)勢菌具有一致性。細菌鑒定結果表明菌株060904E為哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)，哈維氏弧菌被視為渡夏期間養(yǎng)殖刺參腐皮綜合癥的致病原。刺

9、參腐皮綜合癥的發(fā)生與養(yǎng)殖池塘的水質(zhì)惡化和池塘水體和底泥中致病性弧菌數(shù)量密切相關。 本文研究表明，惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)和哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)是青島地區(qū)養(yǎng)殖刺參腐皮綜合癥的重要致病原，這為豐富養(yǎng)殖刺參的病原學研究奠定了理論基礎。同時本文揭示了池塘養(yǎng)殖條件下，刺參腐皮綜合癥的發(fā)生與池塘水體的惡化及底泥中病原菌數(shù)量密切相關，對刺參養(yǎng)殖中的健康管養(yǎng)殖刺參(Apostichopus ja