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文檔簡介
1、本研究用一段人工合成的CpG序列與豬圓環(huán)病毒PCVwhn株編碼CAP蛋白的基因(ORF2)共同構建一種含CpG寡核苷酸的新型豬圓環(huán)病毒Ⅱ型基因疫苗(pcDNA-PCV-ORF2-CpG)。將5種豬細胞因子IL-2,IL-4,IL-6,IL-6/4,IFN-γ及含CpG寡核苷酸的真核表達質粒作為分子免疫佐劑,與本實驗室保存的pcDNA-PCV-ORF2基因疫苗共同免疫仔豬,采用間接ELISA試驗和流式細胞儀(FACS)分別對仔豬特異性抗P
2、CV2抗體IgG和外周血T淋巴細胞亞類CD<'3>+、CD<'4>+、CD<'8>+的動態(tài)變化進行檢測。 以本試驗室申請的大規(guī)模提取質粒的專利方法進行基因疫苗和分子佐劑的制備,并以殼聚糖進行包裹。 將基因疫苗pcDNA-PCV-ORF2和6種分子佐劑pcDNA-PCV-ORF2-CpG,IL-2,IL-4,IL-6,IL-6/4,IFN-γ,按照1:1的比例以250μg和500μg 兩種劑量肌注免疫仔豬,檢測仔豬的外周血
3、中CD<'3>+、CD<'4>+、CD<'8>+T淋巴細胞數(shù)和仔豬血清中特異性PCV2血清抗體IgG動態(tài)變化。結果表明,pcDNA-PCV2-ORF2基因疫苗免疫仔豬后,特異性抗體和T淋巴細胞數(shù)顯著升高,與對照組差異顯著(P<0.05)。 pcDNA-PCV-ORF2-CpG 組免疫仔豬后,外周血T淋巴細胞有明顯的反應性,CD<'3>+T淋巴細胞數(shù)實驗組高于對照組,差異極顯著(P<0.01)或顯著(P<0.05)。但是各佐劑試驗
4、組之間差異不顯著(P>0.05)。pcDNA-PCV-ORF2-CpG基因疫苗免疫仔豬后誘導仔豬產(chǎn)生了PCV2特異性抗體,與空載體及空白對照組相比,差異極顯著(P<0.01);各佐劑試驗組之間差異不顯著(P>0.05)。pcDNA-PCV-ORF2-CpG抗體水平高于pcDNA-PCV2-ORF2組,且持續(xù)時間長,大劑量組優(yōu)于小劑量組。 豬細胞因子佐劑組免疫仔豬后,細胞和體液水平都高于未加佐劑組和對照組,差異極顯著(P<0.01
5、)或顯著(P<0.05)。細胞免疫方面IL-2,IFN-γ佐劑組的抗體水平要明顯高于其他佐劑組,差異顯著(P<0.05),IL-2和IFN-γ佐劑組的CD<'3>+T淋巴細胞數(shù)在免疫仔豬后第35d達到最高。而IL-4,IL-6,IL-6/4佐劑組在體液免疫方面表現(xiàn)出明顯的佐劑效應,與空載體組和對照組差異顯著(P<0.05)。其中IL-6佐劑組的抗體水平升高快,持續(xù)的時間長(90d)。pcDNA-PCV2-ORF2基因疫苗和豬細胞因子共同
6、免疫仔豬后誘導仔豬產(chǎn)生了良好的體液和細胞免疫應答。 結果表明PCV2 DNA疫苗與以上佐劑的配合均能夠誘導仔豬產(chǎn)生良好的體液和細胞免疫應答,以CpG和IL-6的免疫增強作用最佳,IL-6/4,IL-2,IL-4和IFN-γ次之,并且呈劑量相關性。本研究應用豬圓環(huán)病毒DNA疫苗和CpG及5種細胞因子為佐劑,以殼聚糖納米載體包裹后,按不同劑量肌肉免疫仔豬,探討了其體液和細胞免疫應答,旨在為PCV2基因疫苗的臨床應用提供科學依據(jù)。應用
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