IL-15基因佐劑對(duì)HIV-1 gag DNA疫苗免疫效應(yīng)的影響.pdf

1、人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)感染所致的人類(lèi)獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS，簡(jiǎn)稱(chēng)艾滋病)在全球的迅速傳播已經(jīng)對(duì)人類(lèi)健康造成了嚴(yán)重的威脅，研制安全有效的HIV疫苗可最終解決艾滋病的預(yù)防問(wèn)題。HIV核酸疫苗一直為研究者所關(guān)注，然而，其免疫效力不強(qiáng)，且效果不持久。因此利用各種免疫佐劑來(lái)增強(qiáng)HIV核酸疫苗的免疫效果正在成為艾滋病疫苗研究中的新策略。HIV病毒gag基因編碼的GAG結(jié)構(gòu)蛋白突變率較低，且具有能被Balb/c小鼠識(shí)別的特異性T表位，常常

2、被作為HIV疫苗研究中的首選蛋白。而本課題組長(zhǎng)期以來(lái)對(duì)細(xì)胞因子白介素(IL)-15的免疫作用和機(jī)制進(jìn)行了深入的研究，發(fā)現(xiàn)lL-15在抗腫瘤免疫中具有增強(qiáng)免疫反應(yīng)的作用。因此，本研究將觀察IL-15作為疫苗佐劑對(duì)HIV-1 gag DNA疫苗激發(fā)的機(jī)體免疫應(yīng)答的效用，并與IL-2的功能進(jìn)行比較。 主要研究工作包括： (1)構(gòu)建體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，研究IL-15對(duì)于CD8+αβT細(xì)胞，NK細(xì)胞及γδT細(xì)胞的增殖活化作用從正常人

3、外周血中分離得到一定純度的CD8+αβ T細(xì)胞、NK細(xì)胞和γδ T細(xì)胞，在IL-2/IL-15與HIV-1 gag蛋白共培養(yǎng)刺激下，結(jié)果顯示IL-15和IL-2均能夠增強(qiáng)NK細(xì)胞、γδT細(xì)胞和特異性CD8+αβ T細(xì)胞的增殖活性和細(xì)胞毒活性，而且IL-15刺激NK細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒的作用強(qiáng)于IL-2。ELISpot檢測(cè)IL-2/IL-15刺激產(chǎn)生的特異性CD8+T細(xì)胞克隆頻率的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，IL-15與HIV-1 gag共培養(yǎng)組的細(xì)胞顯示

4、了比其它各組高得多的克隆頻率。 (2)建立小鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，研究IL-15 DNA佐劑的的最佳免疫時(shí)相和免疫激活效用，并探討IL-15產(chǎn)生長(zhǎng)效免疫應(yīng)答的機(jī)制將含IL-2基因和IL-15基因的質(zhì)粒分別作為免疫佐劑與HIV-l gag DNA疫苗共同免疫小鼠后，檢測(cè)小鼠體內(nèi)的針對(duì)HIV-1 gag的免疫應(yīng)答。結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL-15 DNA佐劑共免疫能夠增強(qiáng)抗原特異性CD8+T淋巴細(xì)胞增殖和IFN-γ分泌。特別是免疫后第3天，以IL-15 D

5、NA佐劑共免疫的小鼠就可以對(duì)抗原刺激迅速產(chǎn)生免疫應(yīng)答，說(shuō)明IL-15可以增強(qiáng)抗原特異性T細(xì)胞的效應(yīng)功能并激活記憶性免疫應(yīng)答。此外，IL-15DNA佐劑共免疫還能維持記憶性B細(xì)胞的長(zhǎng)效抗體分泌水平，從而為機(jī)體提供保護(hù)性免疫應(yīng)答。 進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示單獨(dú)IL-15 DNA佐劑加強(qiáng)可以成功的增強(qiáng)HIV-1 gagDNA疫苗所誘導(dǎo)的記憶性細(xì)胞免疫和體液免疫。在加強(qiáng)注射5周之后，IL-15 DNA佐劑加強(qiáng)組小鼠脾細(xì)胞增殖活性和特異性CD

6、8+T細(xì)胞克隆頻率開(kāi)始顯著高出IL-2DNA佐劑加強(qiáng)組和對(duì)照組，一直持續(xù)到加強(qiáng)注射之后至少20周。在加強(qiáng)注射20周之后血清中anti-HIV-gag的抗體也保持穩(wěn)定水平。此外，不論共免疫時(shí)使用的佐劑是IL-2 DNA還是IL-15 DNA，單獨(dú)IL-15：DNA佐劑加強(qiáng)均能增強(qiáng)HIV-1 gag DNA疫苗激發(fā)的細(xì)胞免疫應(yīng)答。 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)一步顯示，加強(qiáng)注射后，CD62Lhigh中樞記憶T細(xì)胞陽(yáng)性率增加，提示IL-15可