益腎化瘀方對(duì) TGF-β1誘導(dǎo)大鼠腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的TGF-β1-Smad2-3信號(hào)通路的影響.pdf

1、　　目的：實(shí)驗(yàn)研究益腎化瘀方對(duì) TGF-β1 誘導(dǎo)的大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞(NRK52E)發(fā)生轉(zhuǎn)分化的作用以及對(duì) TGF-β1、α-SMA、p-Smad2/3表達(dá)的影響,探討益腎化瘀方對(duì) RIF 防治作用的可能機(jī)制,為臨床上應(yīng)用益腎化瘀方防治 RIF 提供理論依據(jù)。
　　方法：以纈沙坦(纈沙坦)組為陽(yáng)性對(duì)照,將體外培養(yǎng)的大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞分為：①正常對(duì)照組；②TGF-β1 刺激組；③益腎化瘀方低劑量組；④益腎化瘀方中劑量組

2、；⑤益腎化瘀方高劑量組；⑥纈沙坦組。培養(yǎng) 48h 后取出,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR(realtime fluorescence quantitative PCR, RTFQ PCR)技術(shù)檢測(cè) TGF-β1mRNA、α-SMAmRNA和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞 p-smad2/3 蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：(1)與正常對(duì)照組相比, TGF-β1 刺激組細(xì)胞從鋪路石樣上皮細(xì)胞向梭形肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變,益腎化瘀方大劑量組及纈沙坦組細(xì)胞形態(tài)

3、學(xué)變化均較小,仍保持鋪路石樣生長(zhǎng)。益腎化瘀方中、小劑量組均表現(xiàn)為部分細(xì)胞呈現(xiàn)鋪路石樣,部分細(xì)胞呈梭形,兩者數(shù)量比例基本相當(dāng)。
　　( 2)與正常對(duì)照組相比, TGF-β1 誘導(dǎo)組細(xì)胞 α-SMA、TGF-β1 的mRNA 及 p-Smad2/3 蛋白表達(dá)顯著升高( P<0.05),益腎化瘀方大劑量組 α-SMA、TGF-β1的 mRNA 及 p-Smad2/3 蛋白表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別( P>0.05)；益腎化瘀方大劑量組和纈沙坦

4、組 α-SMA、TGF-β1 的 mRNA及 p-Smad2/3 蛋白的表達(dá)與 TGF-β1誘導(dǎo)組差異顯著( P<0.05)；纈沙坦組作用與益腎化瘀方大劑量組作用相似。
　　結(jié)論： TGF-β1 可誘導(dǎo) NRK52E 細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)變,上調(diào) α-SMA 的表達(dá)。益腎化瘀方可拮抗 TGF-β1 對(duì) NRK52E 細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化效應(yīng),呈劑量依賴性抑制 TGF-β1 誘導(dǎo)下 NRK52E 細(xì)胞 α-SMA、TGF-β1 的表達(dá),下調(diào)發(fā)生