基于細胞水平的葉酸復合物靶向腫瘤效果評價.pdf

1、y773069旦欠學。學校代碼：10246學號：022103125碩士學位論文基于細胞水平的葉酸復合物靶向腫瘤效果評價院系(所)：專業(yè)：姓藥學院藥劑學指導教師：完成日期：陸偉躍教授2005年5月朱噬疼≯急勿壘《公伍中文摘要基于細胞水平的葉酸復合物靶向腫瘤效果評價摘要葉酸受體是一種糖基化磷脂酰肌醇連接的膜糖蛋白，對葉酸及其類似物有高度的親和力和親合常數及免疫決定簇，分子量為38—44KDa。FR較均勻散布于細胞膜表面，結合葉酸后，在誘導劑

2、作用下形成被膜小凹(coatedpits)或凹穴(coveolae)內集束，隨之發(fā)生細胞內吞，將葉酸傳輸至胞內。受體介導的內吞途徑是指配體與細胞膜表面受體專一性結合并被內化的過程。首先，配體與其靶細胞特異的膜表面受體結合，并富集在靶細胞特定區(qū)域(包涵體被膜小凹處)，該區(qū)域向胞漿內陷形成胞內體，在酸性(pH5O～55)胞內體中受體與配體分離，受體返回細胞膜表面，而內化的配體或被溶酶體降解，或由此釋放入胞漿。與多數受體一樣，葉酸受體與其配體

3、的結合具有飽和性、可逆性和競爭性，一般結合速度快，解離速度慢。本研究的主要目的在于，從細胞水平探討并確立葉酸復合物的靶向腫瘤效果，為葉酸受體介導的抗腫瘤藥物的后續(xù)研究提供實驗基礎。本研究的主要內容包括：評價葉酸復合物靶向能力的細胞模型建立；葉酸復合物與腫瘤細胞特異性結合評價；葉酸脂質體抗腫瘤活性的細胞學水平評價；飼料中葉酸含量對動物生長和葉酸復合物腫瘤靶向性影響的評價。集落形成法考察不同葉酸濃度培養(yǎng)液對細胞生長影響的試驗結果表明，在一定

4、濃度范圍內，兩種細胞的集落形成率都隨培養(yǎng)液中葉酸濃度的增加而急劇增加，當葉酸濃度達到56638nmol／L逐漸趨于飽和。使用人體生理條件下葉酸濃度的培養(yǎng)液時，集落形成率約為50％左右，并不影像細胞維持正常生理功能。普通培養(yǎng)液中葉酸對腫瘤細胞特異攝取葉酸復合物的影響試驗結果表明，普通RPMll640培養(yǎng)基中大量的游離葉酸可與葉酸復合物競爭腫瘤細胞表面的葉酸受體，從而抑制了細胞對葉酸復合物的攝取。因此，在后續(xù)的葉酸復合物的體內外靶向及藥效學

5、研究中將使用無葉酸RPMll640作為培養(yǎng)基。通過放射性配基受體結合分析法測定了三種人體腫瘤細胞株的葉酸受體，從而篩選出富含葉酸受體的KB細胞和SGC7901細胞，后續(xù)的研究將圍繞這兩株細胞展開。其中，國內建株的胃腺癌SGC7901細胞表面高度表達葉酸受體，與國外普遍報道的KB細胞的葉酸受體數量近乎一致，為葉酸受體介導的胃癌治療藥物的研發(fā)奠定了實驗基礎，具有潛在的臨床實用意義。F1TC標記后并不影響葉酸復合物本身的生物活性，F—EDA—