腫瘤細胞葉酸受體的表達及其靶向siRNA干擾研究.pdf

1、目的：檢測腫瘤細胞株葉酸受體的表達，以此作為腫瘤靶標(biāo)，以GFP和luciferase作為報告基因，探討其靶向腫瘤細胞siRNA的干擾效應(yīng)。
　　 方法
　　 1.以FITC標(biāo)記的folate-pRNA作為檢測分子，采用流式細胞術(shù)和倒置熒光顯微術(shù)，檢測腫瘤細胞株葉酸受體的表達；
　　 2.通過脂質(zhì)體技術(shù)共轉(zhuǎn)染pGL3-control，pRL-TK和pRNA/siRNA（luciferase），研究其對螢光素酶的干擾

2、效應(yīng)，并以pRNA/siRNA（GFP）設(shè)為對照組；
　　 3.通過脂質(zhì)體技術(shù)共轉(zhuǎn)染pEGFP-N2和pRNA/siRNA（GFP），研究其對GFP的干擾效應(yīng)，并以pRNA/siRNA（luciferase）設(shè)為對照組；
　　 4.體外將folate-pRNA與pRNA/siRNA（luciferase）混合形成納米顆粒，與細胞共孵育，通過雙螢光素酶報告檢測系統(tǒng)測定螢光素酶的活性。
　　 結(jié)果
　　 1.

3、FCM檢測結(jié)果表明，25種腫瘤細胞株中，01和02細胞株表面高表達葉酸受體；
　　 2.報告基因載體與siRNA載體共轉(zhuǎn)染實驗表明，轉(zhuǎn)染pRNA/siRNA（lueiferase）可明顯降低螢光素酶的活性，對GFP表達無影響；而轉(zhuǎn)染pRNA/siRNA（GFP）可顯著抑制轉(zhuǎn)染細胞GFP的表達，對luciferase的表達無明顯影響；表明siRNA干擾具有特異性；
　　 3.通過folate-pRNA與pRNA/siRNA