前列腺癌組織中谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶P1基因啟動子區(qū)域甲基化序列分析.pdf

1、[背景] 前列腺癌(PCA)是美國男性中第二位的癌癥死亡原因,并且九分之一的65歲以上的老年男性會受到該疾病的困擾。據(jù)報道,2001美國有200,000的被診斷為前列腺癌,31,500患者死于前列腺癌。近年來,我國前列腺癌的發(fā)病率也呈逐漸上升趨勢。對于早期發(fā)現(xiàn)的局灶性前列腺癌的患者進行前列腺癌根治手術(shù)是最好的治療手段,愈后理想。因此,前列腺癌檢測的目標就在于能夠在疾病的早期和可以達到根治的階段明確診斷。當前,前列腺癌主要依靠直腸指診和血

2、清前列腺特異性抗原(PSA)水平進行篩選,在前列腺癌的患者中,PSA往往呈現(xiàn)較高的水平,最后依靠經(jīng)直腸穿刺活檢明確診斷。但是,PSA的低特異性常常出現(xiàn)大量的假陽性和假陰性結(jié)果,影響臨床判斷。所以,探索一個新的前列腺癌特異性的診斷指標是亟待解決的課題。 抑癌基因啟動子區(qū)域CPG島的超甲基化導致基因表達缺失,這是人類腫瘤的-個普遍特點。谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GSTs)是一組能夠通過催化細胞內(nèi)外源性化學物質(zhì)和致癌物與谷胱甘肽進行結(jié)合,從而達

3、到細胞內(nèi)解毒保護組織細胞作用的家族酶系。其中,GSTP1是其中分布最為廣泛,且在癌癥中研究最為深入的一種。國外報道,在前列腺癌組織中GSTP1基因5'端啟動子編碼區(qū)出現(xiàn)了超甲基化的表現(xiàn),甲基化發(fā)生頻率高達90～96％。然而,國內(nèi)的一項研究報道,在50例前列腺癌組織中GSTP1基因非甲基化發(fā)生率為86％,并沒有發(fā)現(xiàn)甲基化。這與國外的研究截然不同,因此,對我國人群中前列腺癌患者進行GSTP1基因啟動子區(qū)域甲基化狀態(tài)分析是值得我們深入研究的。

4、 [目的]探討中國人群前列腺癌、前列腺增生以及正常前列腺組織中GSTP1基因啟動子區(qū)域CPG島的甲基化狀態(tài),探索前列腺癌早期診斷的檢測方法。 [方法]收集31例前列腺癌組織(PCa)、18例前列腺增生組織(BPH)以及3例正常前列腺組織(NP)。提取組織DNA后進行重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化,通過巢式甲基化特異性聚合酶連反應(NMSP)方法檢測GSTP1基因啟動子區(qū)域進行甲基化狀態(tài),并應用T-載體連接,大腸桿菌感態(tài)細胞對目的基因克

5、隆測序。 [結(jié)果]PCA、BPH和NP組GSTP1基因啟動子區(qū)域甲基化的發(fā)生率分別為83％,0％和0％。19條PCA基因序列的(19×38)722個CG位點,28條BPH基因序列的(28×38)1064個CG位點以及29條NP基因序列的(29×38)1102個CG位點的甲基化率分別為96％,34％和37％?？ǚ綑z驗分析,PCA組和BPH、NP組GSTP1基因啟動子區(qū)域CG位點的甲基化率具有顯著的統(tǒng)計學意義,BPH組和NP組GST