人前列腺癌相關新基因PC-1啟動子的克隆與分析.pdf

1、PC-1基因是由該室周建光研究員發(fā)現并克隆的,該基因在雄激素非依賴性和高惡性程度的前列腺癌細胞中表達上調;在前列腺組織特異性表達;表達受雄激素信號轉導途徑調控.目前對其在轉錄水平的表達調控還不清楚,為此開展了PC-1基因啟動子的克隆與分析研究.首先用PCR方法從前列腺癌細胞染色體上獲得了PC-1基因翻譯起始位點上游5-kb的序列,將其克隆在表達載體pGL3-basic上,隨后克隆了一系列啟動子5′側翼缺失的表達載體.瞬時轉染前列腺癌細胞

2、發(fā)現5-kb啟動子區(qū)的轉錄活性最高,在雄激素撤除的培養(yǎng)條件下,該啟動子比前列腺特異性抗原6-kb啟動子的轉錄活性還高.研究發(fā)現5-kb的啟動子區(qū)表現出了較強的前列腺細胞特異性轉錄調控的能力,這種特異性調控主要是由PC-1翻譯位點上游4kb~5kb的調控區(qū)來實現的,4kb~5kb的調控區(qū)還體現出了增強子的特征.另外還證明了在PC-1翻譯起始位點上游第345-359位15bp的堿基是雄激素受體反應元件,該段序列缺失的啟動子失去了對雄激素的應

3、答能力.實驗證明p53能夠抑制PC-1啟動子的轉錄調控能力.在前列腺癌LNCaP細胞中p53的抑制功能部分是通過PC-1啟動子上的雄激素受體反應元件來完成的.而在惡化程度更高的前列腺癌C4-2細胞中p53對啟動子轉錄抑制的功能減弱了.可能這正是造成PC-1在這兩種細胞中差異表達的因素之一.PC-1基因5-kb啟動子的前列腺細胞特異性表達調控能力以及較高的轉錄活性,使其有望在前列腺癌的基因治療和建立前列腺癌轉基因動物模型中發(fā)揮作用.我們用