脂代謝關(guān)鍵因子在高脂喂養(yǎng)的LDLR---小鼠脂肪肝形成中的機(jī)理探討.pdf

1、非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)是指排除酒精和其它明確的損肝因素所致的以彌漫性肝細(xì)胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合征。NAFLD包括一系列相互聯(lián)系的病理改變，包括單純性脂肪肝及由其演變的脂肪性肝炎(nonalcoholicsteato-hepatitis，NASH)和脂肪性肝硬化三種類型。NAFLD是2型糖尿病(type2 diabetes mellitus，T2D

2、M)、胰島素抵抗(insulin resistant，IR)和肥胖的一種較為常見的肝臟并發(fā)癥。據(jù)資料顯示2.6％正常體重兒童、52.8％肥胖兒童都有NAFL，NASH在人群中的發(fā)病率也已經(jīng)達(dá)到2％-3％。近來的研究表明單純性脂肪肝預(yù)后良好，而近一半的NASH患者可發(fā)展至肝纖維化，約15％發(fā)展至肝硬化，3％進(jìn)展至肝衰竭。但是NAFLD發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制尚未完全明確。
　　本實驗通過高脂喂養(yǎng)，在低密度脂蛋白缺失(LDLR-/-)小鼠的

3、基礎(chǔ)上建立了NAFLD模型。分別于小鼠3周齡時喂養(yǎng)高脂飲食(HFD)和標(biāo)準(zhǔn)飲食(ND)，并于3、6、10、14和18周齡，解剖取材，應(yīng)用實時定量RT-PCR技術(shù)檢測高脂喂養(yǎng)小鼠與普通喂養(yǎng)小鼠肝臟脂代謝相關(guān)基因表達(dá)差異，并進(jìn)行血生化指標(biāo)檢測及肝臟形態(tài)學(xué)觀察。探討脂代謝相關(guān)基因在LDLR-/-小鼠肝脂肪變性形成和發(fā)展中的作用，結(jié)果如下:
　　①血生化指標(biāo)檢測:與ND小鼠相比，HFD喂養(yǎng)小鼠6周齡時表現(xiàn)為體重增加、胰島素水平升高和IR增

4、強(qiáng)，并持續(xù)至18周齡。HFD喂養(yǎng)小鼠血糖在18周齡時顯著升高，達(dá)T2DM標(biāo)準(zhǔn)。該組小鼠血清中的血清總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)含量于6周齡時較ND喂養(yǎng)小鼠明顯

5、升高，并持續(xù)升高至18周齡。肝功能指標(biāo)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine amino transferase，ALT)及天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate amino transferase，AST)分別從10周齡和14周齡時顯著升高(P＜0.05)，持續(xù)升高至18周齡。從6周齡時HFD小鼠肝臟FFA含量較ND組小鼠顯著升高，并持續(xù)至18周齡。10周齡開始HFD小鼠肝臟TG含量較ND組小鼠顯著升高，持續(xù)至18周齡。
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6、肝臟病理形態(tài)檢測:油紅O染色顯示，HFD喂養(yǎng)組小鼠6和10周齡時肝細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)大小不等的脂滴，呈現(xiàn)肝脂肪變性。14和18周齡時肝臟脂肪變性程度明顯加重。各年齡段的ND喂養(yǎng)小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)完整，小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞內(nèi)均未觀察到明顯的脂質(zhì)沉積。
　?、刍虮磉_(dá)變化特征:與ND喂養(yǎng)小鼠相比，HFD喂養(yǎng)小鼠脂代謝調(diào)控因子轉(zhuǎn)錄因子肝X受體α(liver X receptorα，LXRα)、SREBP1c、糖原合酶激酶(glycogen sy

7、nthase kinase，GSK3β)及生脂基因乙酰輔酶A羧化酶α(acetyl CoA carboxylaseα，ACCα)、脂肪酸合酶(fatty acid synthase，F(xiàn)AS)和硬脂?；o酶A脫氫酶1(Stearoyl-CoA desaturase-1，SCD-1)、乙酰輔酶A羧化酶β(acetyl CoA carboxylaseβ，ACCβ)和磷酸甘油酯酰轉(zhuǎn)移酶(glycerol phosphate acyltransf