利用cDNA-AFLP技術(shù)研究附加-丟失異源染色體小冰麥的基因表達(dá)差異.pdf

1、隨著世界人口的不斷增長(zhǎng)，對(duì)糧食總量的需求也不斷增加。目前，主要通過(guò)雜種優(yōu)勢(shì)的利用來(lái)實(shí)現(xiàn)農(nóng)作物增產(chǎn)的目的。盡管雜種優(yōu)勢(shì)在生產(chǎn)應(yīng)用中創(chuàng)造了巨大的經(jīng)濟(jì)效應(yīng)，但人們對(duì)于雜種優(yōu)勢(shì)機(jī)理的認(rèn)識(shí)仍然十分有限，這嚴(yán)重束縛了對(duì)雜種優(yōu)勢(shì)的進(jìn)一步利用。分離雜種和親本之間的差異表達(dá)基因?qū)τ诮沂倦s種與親本的基因表達(dá)特征、闡明重要基因功能及理解雜種優(yōu)勢(shì)的機(jī)理具有重要意義。 本研究異附加系10-44，13-44和相對(duì)應(yīng)的在后代中丟失異源染色體的10-42，13

2、-42小冰麥為材料，采用cDNA．AFLP技術(shù)對(duì)附加和丟失異源染色體的品系進(jìn)行基因表達(dá)差異的研究，分離克隆了大量差異表達(dá)基因，并對(duì)部分序列進(jìn)行了差異表達(dá)驗(yàn)證和形成機(jī)理的初步研究。主要結(jié)果如下： 1．以小麥葉片為材料，采用cDNA-AFLP方法分析兩種樣本之間的序列表達(dá)特征，并分離它們之間的差異表達(dá)序列。256對(duì)引物組合共檢測(cè)出約600多個(gè)差異片段，差異表達(dá)既有質(zhì)上的差異也有量上的差異。回收了其中的269個(gè)差異片段進(jìn)行測(cè)序并進(jìn)行序

3、列比對(duì)，其中10號(hào)71個(gè)，13號(hào)198個(gè)。blast(EST)比對(duì)結(jié)果表明，這些序列大部分來(lái)自于小麥屬cDNA文庫(kù)，由于對(duì)小麥基因的功能研究的較少，所以多數(shù)序列沒(méi)有找到確切的功能。 2．對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析，從中挑選了79個(gè)差異片段設(shè)計(jì)特異引物進(jìn)行RT-PCR和Rea1-Time PCR定量檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果表明29個(gè)序列表達(dá)量有差異，其中11個(gè)是有和無(wú)的差異，18個(gè)是表達(dá)量多少的差異。在11個(gè)表達(dá)量有和無(wú)差異的序列中，有一個(gè)是由于基