不同棉花品種伸長期纖維基因表達(dá)差異的cDNA-AFLP分析.pdf

1、前人已經(jīng)獲得上萬條棉纖維發(fā)育相關(guān)的基因或基因表達(dá)序列標(biāo)簽，并對(duì)少數(shù)進(jìn)行了功能研究，沒有找到能解釋不同基因型間纖維品質(zhì)差異的主基因，為了利用遺傳工程等手段對(duì)棉纖維強(qiáng)度品質(zhì)進(jìn)行改良，有必要繼續(xù)篩選這樣的主基因。另外，已有的棉纖維發(fā)育相關(guān)基因數(shù)據(jù)庫中的基因仍然存在遺傳基礎(chǔ)較窄，纖維發(fā)育時(shí)期覆蓋面不全的問題，有必要對(duì)這些數(shù)據(jù)庫進(jìn)行補(bǔ)充。本文的實(shí)驗(yàn)材料包括五個(gè)纖維高強(qiáng)的品種 (2001、7235、貝爾斯諾、Acala1517-77、PD5246)

2、、一個(gè)對(duì)照品種中棉所36及對(duì)照品種與五個(gè)高強(qiáng)材料的雜交一代，利用cDNA-AFLP技術(shù)分析這11個(gè)品種伸長期纖維基因表達(dá)的差異，建立了一套適合纖維發(fā)育各個(gè)時(shí)期的基因表達(dá)差異的研究體系，并獲得一些可能與纖維強(qiáng)度品質(zhì)差異形成相關(guān)的基因表達(dá)序列標(biāo)簽。 1.通過研究纖維發(fā)育動(dòng)態(tài)，確定了11個(gè)供試品種發(fā)育時(shí)期相對(duì)一致的取樣點(diǎn)。 2.比較了兩套cDNA-AFLP方案，方案Ⅱ在實(shí)驗(yàn)的可操作性、結(jié)果的可靠性、節(jié)約工作量與時(shí)間、RNA用量

3、等方面都優(yōu)于方案Ⅰ，確定方案Ⅱ更適合于研究次生壁增厚期纖維基因表達(dá)差異。 3.用方案ⅡI對(duì)11個(gè)品種的伸長期纖維進(jìn)行了基因表達(dá)差異分析，分析了208對(duì)選擇性擴(kuò)增引物，發(fā)現(xiàn)并回收了57個(gè)差異條帶，這些差異條帶表現(xiàn)為六種差異類型。 4.選取六條差異條帶進(jìn)行了克隆測(cè)序，同源序列比對(duì)結(jié)果顯示：SZ5-10/13-1為棉屬LTP家族基因；SZ10-12/135-1 與擬南芥中線粒體伸長假設(shè)因子同源性達(dá)83％；SL3-14/2-1與

4、SL3-15/5-1測(cè)序結(jié)果相同，與水稻和擬南芥中的未知蛋白同源性達(dá)60％； SL13-16/q-1為未知基因；SL13-15/5-1與擬南芥中胼胝質(zhì)合酶同源性達(dá)84％，與水稻中假設(shè)的胼胝質(zhì)合酶同源性達(dá)80％。 5.對(duì)SL13-15/5-1 做RT-PCR 分析，結(jié)果其在PD5246品種的根、下胚軸、子葉中均不表達(dá)，在PD5246的伸長期纖維 (12DPA、19DPA)中明顯表達(dá)，但是在29DPA纖維中不表達(dá)；另外該片段在11個(gè)