

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、p75NTR(p75neurotrophinreceptor)是神經(jīng)生長(zhǎng)因子(neurotrophin,NT)的低親和力受體,由427個(gè)氨基酸組成,屬于腫瘤壞死因子受體超家族(TNFR)的一員。p75NTR不僅在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育中起重要作用,而且在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中也起重要作用。
既往的研究表明,p75NTR是一個(gè)潛在的抑癌基因,它可以抑制前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。然而有報(bào)道認(rèn)為p75NTR也可以作為生存受體促進(jìn)黑色素瘤細(xì)胞的腦轉(zhuǎn)移,這
2、一矛盾提示p75NTR在不同的腫瘤中可能發(fā)揮了不同的作用。我科先前的研究發(fā)現(xiàn),p75NTR在胃癌中的表達(dá)顯著低于癌旁組織,p75NTR可以抑制胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。迄今為止,p75NTR在肝癌中的表達(dá)情況及在肝癌生長(zhǎng)中的作用尚不清楚,本課題將對(duì)此進(jìn)行探討。
【目的】
1、研究p75NTR在肝癌及癌旁組織中的表達(dá)情況;2、研究p75NTR對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響;3、探討p75NTR誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞周期阻滯的可能機(jī)制。
3、【方法】
1、利用免疫組化方法研究p75NTR在肝癌及癌旁組織中的表達(dá)。2、WesternBlot方法檢測(cè)肝癌細(xì)胞系和正常肝細(xì)胞系中p75NTR的表達(dá)。3、通過(guò)基因重組方法構(gòu)建p75NTR的siRNA載體,轉(zhuǎn)染Chang細(xì)胞,G418篩選,獲得穩(wěn)定克隆。構(gòu)建p75NTR的正義表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,G418篩選,獲得穩(wěn)定克隆。4、對(duì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞利用Westernblot技術(shù)鑒定不同載體的轉(zhuǎn)染效果。5、MTT法繪制轉(zhuǎn)染細(xì)
4、胞及對(duì)照細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。6、流式細(xì)胞儀分析轉(zhuǎn)染細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞的細(xì)胞周期分布。7、利用Hoechst33258染色法和流式細(xì)胞儀分析法檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的凋亡百分率。8、軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞在體外的成瘤能力。9、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞及其對(duì)照細(xì)胞的體內(nèi)成瘤能力。10、用Westernblot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中細(xì)胞周期相關(guān)分子表達(dá)水平的變化。
【結(jié)果】
1、利用免疫組化技術(shù)檢測(cè)了p75NTR在肝癌和癌旁組織
5、中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)p75NTR在肝癌組織中的表達(dá)顯著低于癌旁組織,肝癌的分化程度越低、臨床分期越差則p75NTR的表達(dá)也越低。2、WesternBlot方法檢測(cè)肝癌細(xì)胞系和正常肝細(xì)胞系中p75NTR蛋白的表達(dá),發(fā)現(xiàn)p75NTR在正常肝細(xì)胞系中表達(dá)較高,而在肝癌細(xì)胞系中表達(dá)較低。3、構(gòu)建了p75NTR的siRNA載體,將其轉(zhuǎn)染Chang細(xì)胞,G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)的克隆,經(jīng)蛋白水平檢測(cè)證實(shí)成功建立了p75NTR下調(diào)的穩(wěn)定細(xì)胞系。同時(shí)構(gòu)建了p
6、75NTR的正義表達(dá)載體,將其轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)的克隆,經(jīng)蛋白水平檢測(cè)證實(shí)成功建立了p75NTR上調(diào)的穩(wěn)定細(xì)胞系。4、用MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn),p75NTR-siRNA轉(zhuǎn)染的Chang細(xì)胞生長(zhǎng)加快,而p75NTR正義轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)減慢。5、細(xì)胞周期檢測(cè)顯示,p75NTR-siRNA轉(zhuǎn)染的Chang細(xì)胞增殖指數(shù)增加,G1/S期的轉(zhuǎn)換加快;而p75NTR正義轉(zhuǎn)染的的HepG2細(xì)胞增殖指數(shù)降低,
7、發(fā)生G1/S期的阻滯。6、Hoechst33258染色法和流式細(xì)胞儀分析法檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的凋亡情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn),p75NTR正義轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞的凋亡百分率增加。7、軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示,p75NTR正義轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)減慢,克隆形成率顯著低于對(duì)照細(xì)胞。8、裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,p75NTR正義轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞的成瘤性顯著低于對(duì)照細(xì)胞。9、Westernblot檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的細(xì)胞周期相關(guān)分子發(fā)現(xiàn),p75NTR表達(dá)的下調(diào)
8、使PCNA、CyclinD1和p-Rb的表達(dá)上調(diào),但使Rb的表達(dá)下調(diào);p75NTR表達(dá)的上調(diào)使PCNA、CyclinD1和p-Rb的表達(dá)下調(diào),但使Rb的表達(dá)上調(diào)。這提示p75NTR通過(guò)上述機(jī)制引起了G1/S期的阻滯。
【結(jié)論】
1、p75NTR在肝癌組織中的表達(dá)顯著低于癌旁組織,肝癌的分化程度越低、臨床分期越差則p75NTR的表達(dá)就越低。2、p75NTR可以抑制肝癌細(xì)胞的增殖,促進(jìn)肝癌細(xì)胞的凋亡,從而抑制了肝癌細(xì)胞的
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體p75抑制胃癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究.pdf
- 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)食管癌細(xì)胞核表達(dá)p75NTR的影響.pdf
- MSCs源性神經(jīng)細(xì)胞的凋亡和p75NTR的作用研究.pdf
- 皮膚及瘢痕成纖維細(xì)胞中神經(jīng)生長(zhǎng)因子p75受體與sortilin的表達(dá).pdf
- 神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體在肝癌組織中的表達(dá)及其意義.pdf
- 組織型激肽釋放酶通過(guò)表皮生長(zhǎng)因子受體促進(jìn)神經(jīng)突生長(zhǎng)的機(jī)制研究.pdf
- 沉默p75NTR基因促進(jìn)舌鱗癌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制研究.pdf
- 針刺對(duì)臂叢神經(jīng)損傷家兔GDNF和P75NTR表達(dá)的影響.pdf
- 神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體與肝癌細(xì)胞增殖與侵襲力關(guān)系的研究.pdf
- 阻斷內(nèi)源性p75NTR對(duì)PTSD大鼠的治療作用及機(jī)制研究.pdf
- 頜下腺、腮腺、淚腺所含表皮生長(zhǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子的比較研究.pdf
- p75NTR與食管上皮細(xì)胞發(fā)育之間的關(guān)系.pdf
- 腫瘤抑制基因與生長(zhǎng)因子
- 神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體對(duì)腺樣囊性癌嗜神經(jīng)侵襲能力影響的相關(guān)研究.pdf
- 神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體p75和Trka在糖尿病大鼠膀胱和腰骶背根神經(jīng)節(jié)的表達(dá).pdf
- p75NTR陽(yáng)性人食管鱗癌細(xì)胞的干細(xì)胞特性研究.pdf
- 慶大霉素中毒大鼠耳蝸中p75NTR和TrkB的表達(dá).pdf
- 毛囊干細(xì)胞合成的β-NGF及受體p75NTR在皮膚創(chuàng)傷修復(fù)早期作用的初步研究.pdf
- 48883.神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素受體trka、p75ntr與ranbpm及其它蛋白之間相互作用的研究
- 神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體TrkA在喉癌中的表達(dá)及意義.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論