抗Asial型FMDV單克隆抗體的研制及抗原捕獲ELISA方法的初步建立.pdf

1、用純化的Asial型口蹄疫病毒免疫Balb/c小鼠，取免疫小鼠脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，經(jīng)間接ELISA和間接免疫熒光(IFA)免疫檢測(cè)方法篩選，有限稀釋法克隆，獲得了6株穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為1B4、1F5、3D9、3E11、3H6和5G3。間接ELISA測(cè)定，6株雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清效價(jià)分別為1：1024、1：256、1：256、1：256、1：64和1：128，小鼠腹水效價(jià)分別為5×10<'-4>、

2、1×10<'-4>、1×10<'-4>、1×10<'-4>、1×10<'-4>和8×10<'-3>：ELISA和IFA結(jié)果顯示，單抗1B4、1F5、3E11、3H6 和5G3僅與Asial型FMDV毒株反應(yīng)，不與O型FMDV毒株反應(yīng)，為抗Asial型FMDV的型特異性單克隆抗體；3D9既與Asial型FMDV毒株反應(yīng)，又與O型FMDV毒株反應(yīng)：表明它為針對(duì)兩種血清型FMDV的共享表位單抗。Western blot分析表明，這6株單克隆抗

3、體均不與全病毒抗原反應(yīng)，表明它們所針對(duì)的抗原表位均為構(gòu)象表位。相加ELISA試驗(yàn)表明，6株單抗分別識(shí)別不同的抗原表位。運(yùn)用胰酶處理的Asial型FMDV抗原進(jìn)行間接ELISA，結(jié)果顯示各株單抗識(shí)別的抗原表位均為胰酶敏感性表位。經(jīng)硫氰酸鹽洗脫法測(cè)定，1B4、1F5、3D9、3E11、3H6和5G3的相對(duì)親和力指數(shù)分別為1.5mol/L、2.5mol/L、3.5mol/L、2.5mol/L、1.0mol/L、和1.5mol/L。 用

4、親和層析純化的?？笰sial型FMDV陽性血清和1B4型特異性單抗，分別作為包被抗體和檢測(cè)抗體，初步建立了快速檢測(cè)Asial型FMDV的抗原捕獲ELISA方法，并對(duì)試驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化。確定的包被抗體的最佳包被濃度為7.375μg/mL，檢測(cè)抗體的最佳使用濃度為0.625μg/mL。敏感性試驗(yàn)表明，該方法對(duì)Asial型FMDV提純抗原的最小檢出量為109ng/100μL，對(duì)細(xì)胞毒的最低檢出量為10<'3>TCID<,50>。特異性試驗(yàn)表明