殼寡糖誘導番茄抗交鏈孢菌及菌毒素提取研究.pdf

1、番茄果實營養(yǎng)豐富，深受各國人民喜愛，但由于果實成熟后多漿汁而易受病原菌侵染，造成腐爛，特別是交鏈孢菌侵染后造成毒素殘留，對番茄的鮮食與加工都會造成重要損失，制約了番茄果實加工與保鮮產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。以生物源殼寡糖為誘抗劑的使用，對果蔬的保鮮提供了新思路。
　　本論文以殼寡糖為外源保鮮劑，以顯微觀察和分光光度計檢測等方法對番茄交鏈孢菌黑霉病進行防治效果與機理的初步研究，同時針對交鏈孢菌的產(chǎn)毒素情況及其致病機制采用了高效液相和質(zhì)譜分析，結(jié)合

2、生物學檢測，確定毒素在致病菌侵染中的作用機理，為以生物技術(shù)防治交鏈孢菌的關(guān)鍵侵入因子提供理論基礎。首先考察了殼寡糖對交鏈孢菌絲和菌孢子的影響，結(jié)果表明:不同濃度(0.01 g/100mL、0.05g/100mL、0.1g/100mL)的殼寡糖對交鏈孢菌絲沒有抑制作用，并且濃度為0.05g/100mL時具有促進作用;不同濃度的殼寡糖對菌孢子的萌發(fā)有明顯的抑制作用，且濃度為0.10 g/100mL時菌孢子幾乎不萌發(fā)。用不同濃度殼寡糖(0.0

3、1g/100mL、0.05g/100mL、0.1g/100mL)配制液體培養(yǎng)基培養(yǎng)交鏈孢菌，測定交鏈孢菌的過氧化氫酶(CAT)的活性，結(jié)果顯示1～3天過氧化氫酶的活性受到抑制，隨后過氧化氫酶活性上升，而且，殼寡糖濃度越高，過氧化氫酶活力越低。
　　利用展開劑（乙酸乙酯∶甲醇∶水=7∶2∶1，v/v/v）對粗毒素展開，經(jīng)顯色發(fā)現(xiàn)，有四種主要成分。粗毒素經(jīng)硅膠柱柱層析后，共收集到36瓶洗脫液，主要活性成分集中在10～19瓶。將收集的第

4、10～19瓶洗脫液合并，稱為精毒素。粗毒素經(jīng)液相色譜分析，成分較單一，主要含一種物質(zhì)，保留時間在3.492 min處。紅外光譜檢測表明，出峰主要在指紋吸收帶，交鏈孢菌中可能含有N-H，-CH2，C=C等基團，集中在伸縮振動區(qū)可能含C-O，C-N，C-C基團。將粗毒素樣品，利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析，共檢測出七種主要有機化合物，其主要成分為環(huán)嗪酮(hexazinone)，化學分子式為C12H20N4O2，分子量為252.31，別名，林

5、草凈，是一種除草劑的主要成分。
　　毒素原液對番茄的4種防御酶POD、PPO、PAL、SOD都有明顯的抑制作用，而防御酶活性的降低是番茄抗病性下降的主要原因;將毒素原液稀釋，抑制作用減弱，當稀釋到20倍時，防御酶活性反而增加。當用0.05 g/100 mL濃度殼寡糖提前處理番茄時，再注入毒素原液，番茄的防御酶活性有所加強，并起到了對番茄果實抗病的效果。所以，毒素具有雙重作用，高濃度下對寄主的致病作用明顯，低濃度時反而能促進植物防御