小克銀漢γ-亞麻酸高產(chǎn)突變株的快速篩選及發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、γ-亞麻酸(γ-linolenicacid，GLA)是一種人體必需的具有多種生理功能的多不飽和脂肪酸。與化學(xué)合成法和動(dòng)植物提取法相比，利用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)GLA具有明顯優(yōu)勢(shì)和潛力，因此積極選育油脂產(chǎn)量和GLA產(chǎn)量高的突變菌株并探索其最適發(fā)酵條件，具有重要經(jīng)濟(jì)意義。 本文以小克銀漢霉C0(Cunninghamellaechinulata)為出發(fā)菌株，經(jīng)5-氟尿嘧啶和紫外線復(fù)合誘變，采用抗失水蘋果酰肼與抗低溫(15℃)相結(jié)合的篩選方

2、法，獲得突變株C23，經(jīng)初步搖瓶發(fā)酵，其生物量為24.70g/L，油脂含量為43.32％，油脂產(chǎn)量為10.73g/L，油脂中GLA含量為12.30％，GLA產(chǎn)量為1.32g/L，上述指標(biāo)比出發(fā)菌株C0分別提高了35.7％、147.4％、236.4％、45.7％和388.9％。 通過單因素實(shí)驗(yàn)及正交實(shí)驗(yàn)，采用250mL三角瓶、5L和50L全自動(dòng)發(fā)酵罐對(duì)突變株C23發(fā)酵生產(chǎn)GLA的發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，并采用超臨界CO2萃取法提取油脂

3、。研究發(fā)現(xiàn)突變株C23發(fā)酵生產(chǎn)GLA的最佳碳、氮源分別是葡萄糖和硝酸銨，發(fā)酵培養(yǎng)基起始葡萄糖濃度為100g/L，硝酸銨濃度為4g/L，5L種子罐接種量為106孢子/mL，培養(yǎng)48h的種子液以10％的接種量移接到50L發(fā)酵罐，通風(fēng)量為30L/min，攪拌速率為300r/min，發(fā)酵液pH值維持在5.5，當(dāng)發(fā)酵進(jìn)行到60h、84h和108h時(shí)，分別補(bǔ)糖15g/L。發(fā)酵前132h，發(fā)酵溫度為28℃，然后降溫至20℃發(fā)酵48h，最后降溫至15℃