脫細(xì)胞真皮基質(zhì)移植后組織學(xué)轉(zhuǎn)歸的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的：本研究通過(guò)移植自制異體脫細(xì)胞真皮基質(zhì)（ADM）,觀察其在體內(nèi)長(zhǎng)期的生物學(xué)轉(zhuǎn)歸中主要成分膠原纖維的變化，探討 ADM浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞 M0及 M1、M2極化關(guān)系,以期揭示 ADM植入體內(nèi)后的長(zhǎng)期組織學(xué)轉(zhuǎn)歸的規(guī)律。
　　研究方法：
　　1.取4只雄性 SD大鼠背部全厚皮片，采用高滲鹽水--Triton X100聯(lián)合戊二醛交聯(lián)法制備出 ADM，并通過(guò)掃描電鏡、組織染色、細(xì)胞毒性檢測(cè)對(duì)其生物學(xué)性能進(jìn)行檢測(cè)評(píng)估。
　　2

2、.取成年雄性SD大鼠40只于脊柱兩側(cè)分別設(shè)計(jì)形成1.5cm×1.5 cm大小深達(dá)脊背深筋膜的皮瓣，將前期制備的合格 ADM植入左側(cè)皮瓣下（實(shí)驗(yàn)組），右側(cè)皮瓣斷蒂后僅作原位縫合（對(duì)照組）。術(shù)后第1、2、3、4、8、12、16、20周每組隨機(jī)處死5只大鼠，取材并行大體觀察、常規(guī) HE染色，及 Masson’s染色和天狼星紅-苦味酸特殊染色，免疫組織化學(xué)染色標(biāo)記及定量巨噬細(xì)胞 M0及M1、M2分型。
　　研究結(jié)果：
　　1.自制

3、ADM真皮結(jié)構(gòu)完整，無(wú)明顯細(xì)胞殘留，ADM浸提液與正常培養(yǎng)液中的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)曲線無(wú)明顯差別。
　　2.術(shù)后大鼠飲食、活動(dòng)不受影響，均存活至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。1)大體觀察，植入 ADM與周圍組織貼合良好，未見(jiàn)明顯炎癥反應(yīng)，5個(gè)月后取出 ADM體積僅見(jiàn)輕度變??；2) HE染色觀察：ADM植入2周內(nèi)以炎性細(xì)胞浸潤(rùn)為主,之后炎性細(xì)胞逐漸減少，成纖維細(xì)胞及新生毛細(xì)血管逐漸增多。植入3個(gè)月以后 ADM內(nèi)細(xì)胞與正常組織無(wú)明顯差別；3)苦味酸－天狼星紅

4、染色分析各時(shí)間段Ⅰ/Ⅲ型膠原比例，各組數(shù)值與未植入前相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；4) Masson’ s三色染色提示植入后的 ADM真皮膠原纖維隨著時(shí)間推移排列逐漸變得規(guī)則、致密；5)巨噬細(xì)胞免疫組化染色提示巨噬細(xì)胞（CD68+）和M1型巨噬細(xì)胞（CCR7），M2型巨噬細(xì)胞（CD163+）表達(dá)于 ADM及其周圍間質(zhì)，統(tǒng)計(jì)不同時(shí)期 M1/M2的比例，ADM組 M2/M1值顯著高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1.交

5、聯(lián)型 ADM植入體內(nèi)后，作為支架材料具有良好的模板引導(dǎo)作用，能引導(dǎo)細(xì)胞及新生血管的遷入，隨著原有膠原的降解及新生膠原的生成，處于膠原動(dòng)態(tài)平衡，可長(zhǎng)期維持穩(wěn)定的體積，化學(xué)交聯(lián)能延遲降解吸收作用，提示 ADM作為填充性支架材料具有良好的臨床應(yīng)用前景。
　　2.目前的研究明確提示不含細(xì)胞成份的 ADM在組織重建反應(yīng)中具有促進(jìn)促炎性 M1巨噬細(xì)胞向行使修復(fù)重建作用的 M2巨噬細(xì)胞極化的作用，相反含細(xì)胞成分的組織，即使是自體移植皮膚主要介導(dǎo)