γδT細(xì)胞殺傷并誘導(dǎo)SW620和HCT116細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、研究目的：
　　通過體外擴(kuò)增健康志愿者外周血γδT細(xì)胞與結(jié)腸癌細(xì)胞共培養(yǎng)，研究γδT細(xì)胞體外殺傷結(jié)腸癌細(xì)胞株SW620和HCT116的細(xì)胞毒作用，并探討γδT細(xì)胞聯(lián)合重組人白介素-2（recombinant human interleukin-2，rhIL-2）、5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的作用。
　　方法：
　?。?）采集健康志愿者外周血，應(yīng)用Ficoll密度梯度離心法分

2、離人外周血單個核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMNC），置于含1umol唑來膦酸（zoledronate，Zol）及100 IU/ml rhIL-2的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)擴(kuò)增γδT細(xì)胞，第7-10天免疫磁珠法分選收集后應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測γδTCR陽性細(xì)胞比率。
　?。?）收獲的γδT細(xì)胞與SW620和HCT116分別按不同的效靶比進(jìn)行共培養(yǎng)，用乳酸脫氫酶（lactate d

3、ehydrogenase，LDH）釋放法測定對癌細(xì)胞的抑制率，流式細(xì)胞術(shù)檢測其致凋亡率。
　?。?）選擇γδT細(xì)胞（效靶比10:1）聯(lián)合不同濃度的rhIL-2與靶細(xì)胞共培養(yǎng)，用LDH釋放法測定對癌細(xì)胞的抑制率。
　?。?）預(yù)實(shí)驗(yàn)確定5-FU抑制結(jié)腸癌細(xì)胞株SW620和HCT116的半數(shù)致死量；LDH釋放法檢測γδT細(xì)胞聯(lián)合IL-2和/或5-FU（半數(shù)致死量）對SW620和HCT116的抑制率，流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡率。
　

4、　結(jié)果：
　?。?）應(yīng)用Zol及rhIL-2在體外培養(yǎng)擴(kuò)增γδT細(xì)胞可獲得較高并穩(wěn)定的產(chǎn)率，培養(yǎng)10天的細(xì)胞經(jīng)免疫磁珠分選收獲的細(xì)胞中γδTCR陽性的細(xì)胞達(dá)98.45％。
　?。?）γδT細(xì)胞對細(xì)胞株SW620和HCT116具有細(xì)胞毒性作用，其抑制增殖作用與致凋亡率均與γδT細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的效靶比相關(guān)。細(xì)胞作用6h后，效靶比為40:1的γδ T細(xì)胞對SW620和HCT116細(xì)胞增殖抑制率最高，分別達(dá)12.55±0.76%和9

5、.36±0.61%；效靶比為40:1組的γδ T細(xì)胞對SW620和HCT116誘導(dǎo)凋亡作用最強(qiáng)，凋亡率分別達(dá)18.26±0.63%和26.46±0.33%。
　?。?）γδT細(xì)胞聯(lián)合rhIL-2后對靶細(xì)胞的細(xì)胞毒作用增加且與IL-2濃度呈劑量-時間依賴相關(guān)。IL-2為400 IU/ml濃度時對SW620和HCT116作用24 h后抑制率分別為8.48±0.31%和18.53±0.75%，聯(lián)合γδ T細(xì)胞組抑制率為14.17±0.6

6、0%和20.82±0.90%。
　?。?）5-FU作用于SW62048 h的半數(shù)致死量濃度約為400 ug/ml，5-FU作用于HCT11648 h半數(shù)致死量的濃度約為4 ug/ml，5-FU抑制HCT116細(xì)胞增殖的效率優(yōu)于SW620。較低效靶比的γδT細(xì)胞和低濃度的IL-2均可增強(qiáng)5-FU殺傷癌細(xì)胞作用，提高抑制率和凋亡率。γδT細(xì)胞和IL-2聯(lián)合5-FU對SW620和HCT116作用48小時的抑制率分別為60.62±1.14