白血病干細胞標志的研究p53對GRO生物學作用的影響.pdf

1、研究目的：白血病干細胞(LSCs)是白血病發(fā)生和耐藥、復發(fā)的重要原因，其具有自我更新能力。目前的研究表明LSCs存在于CD34+/CD38—/CD123+細胞群中，但LSCs的精確表面標記尚不清楚。LSCs通過粘附分子與骨髓基質相互作用可能會促進白血病細胞的自我更新失調和凋亡受阻，這可能是LSCs能夠逃逸化療的機制之一。因此研究骨髓微環(huán)境(niche)相關的細胞表面標記，有助于靶向LSCs治療靶點的發(fā)現(xiàn)。本實驗中我們研究粘附分子N—ca

2、dherin，Tie2和CD44在白血病干細胞中的表達及化療對上述抗原表達富集的影響，探討其是否為LSCs的潛在標志。
　　 研究方法：用流式細胞術檢測63例急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)患者骨髓單個核細胞(BMMNCs)化療前后N—cadherin、Tie2、CD44、CD34、CD38和CD123的表達，觀察LSCs(CD34+/CD38—/CD123+細胞群)中N—cadherin，

3、Tie2和CD44的表達情況。聯(lián)合免疫表型和熒光原位雜交技術，對4例伴有t(8；21)移位患者的 BMMNCs，分選純化 CD34+/CD38—/CD123+/N—cadherin+和CD34+/CD38—/CD123+/Tie2+細胞群和 CD34+/CD38—/CD123+/N—cadherin—和CD34+/CD38—/CD123+/Tie2—細胞群，檢測AML1/ETO的表達情況。實時定量PCR技術，對5例AML患者的BMMNC

4、s，分選純化CD34+/CD38—/CD123+/N—cadherin+和CD34+/CD38—/CD123+/Tie2+細胞群和 CD34+/CD38—/CD123+/N—cadherin—和CD34+/CD38—/CD123+/Tie2—細胞群，檢測耐藥基因MDR1mRNA的表達水平情況。
　　 結果：①在AML患者BMMNCs中N—cadherin和Tie2表達陽性的LSCs比例在停化療當天與化療前比較無明顯差異，在?；?/p>

5、后第7天分別由0.17％、0.02％升高到0.6％、0.94％(P<0.05，P<0.01)，而CD44陽性細胞的LSCs比例由17.28％降低到2.25％(P<0.05)(中位數(shù))；②在LSCs中，N—cadherin，Tie2和CD44表達陽性細胞比例在?；煹牡?天較化療前分別升高了38.17(P=0.03)、210(P<0.01)、1.01(P=0.15)倍(中位數(shù))，提示N—cadherin+和Tie2+的LSCs細胞能抵抗化

6、療，可能是潛在的LSCs標志；③共表達N—cadherin和Tie2的LSC細胞群化療后富集比例高于共表達CD44的LSCs細胞群，提示共表達CD44的LSCs細胞群可能比較成熟，而共表達N—cadherin和Tie2的LSCs細胞群可能是真正的LSC細胞群；④未緩解病例組中，共表達N—cadherin、Tie2和CD44的LSCs細胞群在治療前和停化療后第21天的比例明顯高于緩解組病例，提示共表達N—cadherin、Tie2和CD4

7、4的LSCs細胞群可能是微量殘留細胞，與預后不良有關；⑤細胞遺傳學分組、CD56表達強弱分組及治療前外周血白細胞計數(shù)分組顯示共表達N—cadherin和Tie2的LSCs細胞群在預后不良組中的比例明顯高于良好組，進一步提示N—cadherin+和Tie2+的LSCs與預后不良有關；⑥N—cadherin和Tie2在LSCs細胞群中的表達水平與臨床骨髓涂片的幼稚細胞比例顯著相關，提示檢測共表達N—cadherin和Tie2的LSCs細胞群

8、可作為臨床評估預后及微量殘留病的指標；⑦分選純化的CD34+/CD38/CD123+/N—cadherin+和CD34+/CD38—/CD123+/Tie2+細胞群，檢測到AML1/ETO的融合信號分別是87.53％和92.18％，而分選純化的CD34+/CD38—/CD123+/N—cadherin—和CD34+/CD38—/CD123+/Tie2—細胞群，檢測到AML1/ETO的融合信號分別是72.36％和80.87％，提示AML1

9、/ETO表達在干細胞水平，其惡性程度更高。⑧在分選純化的CD34+/CD38—/CD123+/N—cadherin+細胞中檢測到N—Cadherin mRNA的表達，而在CD34+/CD38—/CD123+/N—cadherin—細胞群中未檢測到N—Cadherin mRNA的表達；在分選純化的CD34+/CD38—/CD123+/Tie2+和CD34+/CD38—/CD123+/Tie2—細胞群中，一位AML患者的標本檢測到N—Cad

10、herinmRNA表達，而另兩位AML患者標本中未檢測到N—Cadherin mRNA表達，提示部分患者LSCs中共表達N—Cadherin和Tie2；⑨分選純化的CD34+/CD38—/CD123+/N—cadherin+和CD34+/CD38—/CD123+/Tie2+細胞群，檢測到MDR1 mRNA，表達水平分別是8.16±1.07和4.18±3.93，而分選純化的CD34+/CD38—/CD123+/N—cadherin—和CD

11、34+/CD38—/CD123+/Tie2—細胞群，檢測到MDR1mRNA，表達水平分別是0.06±0.06和0.46±0.49，進一步說明N—cadherin+和Tie2+的CD34+/CD38—/CD123+比N—cadherin—和Tie2—的CD34+/CD38/CD123+對化療更不敏感。
　　 結論：共表達粘附分子N—cadherin和Tie2的LSCs細胞群具有抵抗化療的作用，能夠通過化療而富集，并表達AML1/E