C3aR1基因在白血病細胞中的生物學作用的研究.pdf

1、碩士學位論文論文題目C3aR1基因在白血病細胞中的生物學作用的研究研究生姓名李爭指導教師姓名胡紹燕專業(yè)名稱兒科學（血液?。┭芯糠较蛐喊籽〉陌l(fā)病機制及靶向治療論文提交日期2013年3月C3aR1基因在白血病細胞中的生物學作用的研究中文摘要IC3aR1基因在白血病細胞中的生物學作用的研究中文摘要第一部分第一部分C3aR1基因慢病毒載體的構(gòu)建基因慢病毒載體的構(gòu)建目的目的：構(gòu)建C3aR1（complementcomponent3arecep

2、t1）基因的慢病毒載體，為研究該基因在白血病細胞中的功能奠定基礎(chǔ)。方法方法：1.利用基因克隆技術(shù)，擴增出人補體C3a受體1(C3aR1)基因，插入pMD19質(zhì)粒中，進行測序分析。2.基因重組構(gòu)建慢病毒載體質(zhì)粒C3aR1Venus，采用磷酸鈣沉淀法轉(zhuǎn)染人腎上皮細胞系293T，包裝慢病毒顆粒。結(jié)果結(jié)果：所獲C3aR1基因經(jīng)測序與GenBank比對序列一致。慢病毒載體質(zhì)粒C3aR1Venus經(jīng)BamHI酶切鑒定片段大小正確。轉(zhuǎn)染72h后在熒光

3、顯微鏡下觀察，大于90%的293T細胞表達綠色熒光蛋白（GreenFluescentProtein，GFP）。結(jié)論結(jié)論：我們成功構(gòu)建帶有C3aR1基因的慢病毒載體，為研究C3aR1基因在白血病細胞中的功能奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞:C3aR1基因；慢病毒載體；293T細胞；HL60第二部分第二部分C3aR1基因在基因在白血病白血病細胞中細胞中穩(wěn)定表達及其穩(wěn)定表達及其生物學功能研究生物學功能研究目的目的：通過慢病毒載體介導C3aR1在白血病

4、細胞株HL60和K562中穩(wěn)定高表達，觀察C3aR1基因及C3aC3aR軸對HL60和K562細胞增殖、分化、凋亡、遷移及細胞周期的影響，初步探討C3aR1基因在白血病細胞中的生物學功能。方法：方法：1.向HL60K562細胞中加入富含慢病毒顆粒的上清液，共培養(yǎng)72h，流式細胞術(shù)（FlowCytometry，F(xiàn)CM）檢測GFP表達情況，評估感染效率；反轉(zhuǎn)錄PCR（reversetranionPCR，RTPCR）、FCM檢測C3aR1在細