阿托伐他汀對(duì)大鼠冠狀動(dòng)脈微栓塞致心肌損傷ERK1-2信號(hào)通路的干預(yù).pdf

1、目的：研究ERK1/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)大鼠冠狀動(dòng)脈微栓塞(Coronary Microembolization CME)致心肌損傷的作用機(jī)制，并探討阿托伐他汀對(duì)該信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的干預(yù)及其對(duì)心功能的保護(hù)作用。 方法：采用夾閉升主動(dòng)脈經(jīng)左室注射42μM微球(3000個(gè))建立大鼠冠狀動(dòng)脈微栓塞模型。隨機(jī)分為6組，分別為假手術(shù)組(S組)、微栓塞組(CME組)、灌胃對(duì)照組、他汀組、他汀負(fù)荷組、PD98059組，每組15例。他汀組和他汀負(fù)荷組術(shù)

2、前7天按10mg/Kg給予阿托伐他汀灌胃，每天1次，其中他汀負(fù)荷組術(shù)前4小時(shí)給予負(fù)荷劑量即20mg/Kg阿托伐他汀灌胃一次；灌胃對(duì)照組則給予等量生理鹽水灌胃，每天1次，連續(xù)7天；PD98059[2-(2，-amino-3，-methoxyphenyl)-oxanaphthalen-4-one]組術(shù)前30min經(jīng)鼠尾靜脈按1mg/Kg注射細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK1/2)抑制劑PD98059。應(yīng)用心臟超聲檢測(cè)心功能指標(biāo)；組織病理切片HE染

3、色觀察炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況；采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法半定量分析大鼠心肌組織腫瘤壞死因子α(TNF-α)和巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF) mRNA表達(dá)水平；Western blot和免疫組化方法分別定量和定位分析心肌組織總ERK1/2和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表達(dá)；電泳遷移率轉(zhuǎn)變分析(EMSA)觀察核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活化程度。 結(jié)果：1.CME顯著激活心肌組織炎癥反應(yīng)，即促炎細(xì)胞因子表達(dá)以及炎

4、癥細(xì)胞浸潤(rùn)增加，與S組比較CME組和灌胃對(duì)照組TNF-α及MIF mRNA表達(dá)及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)均顯著增高(分別P<0.05)。伴隨著心功能顯著下降，心臟超聲表現(xiàn)為左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)、短軸縮短率(FS)和心排血量(CO)下降(S組分別為82.69±3.50％、42.91±2.00％、0.164±0.005L/min，CME組分別為72.97±3.20％、37.69±1.68％、0.095±0.015 L/min;均P<0.05)及左室

5、舒張期末徑(LVEDd)增加(S組與CME組分別為5.10±0.18mm與6.17±0.16mm; P<0.05)。同時(shí)CME顯著增加心肌組織ERK1/2蛋白的磷酸化，與S組相比CME組和灌胃對(duì)照組p-ERK1/2蛋白均顯著增加(分別P<0.05)，免疫組化分析示p-ERK1/2蛋白主要表達(dá)于心肌細(xì)胞核，細(xì)胞溶質(zhì)少量表達(dá)。但心肌組織ERK1/2表達(dá)無(wú)改變。EMSA結(jié)果顯示CME后NF-κB的活性顯著升高，提示NF-κB可能參與CME后轉(zhuǎn)

6、錄炎癥細(xì)胞因子導(dǎo)致的心功能損傷。 2.CME術(shù)前7天連續(xù)給予阿托伐他汀可顯著下調(diào)心肌組織ERK1/2蛋白的磷酸化水平、NF-κB的活化程度、TNF-α和MIF mRNA的表達(dá)以及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量(與灌胃對(duì)照組相比均P<0.05)，并顯著改善心肌收縮功能(他汀組LVEF、FS、CO、LVEDd分別為76.65±4.10％、39.74±2.23％、0.141±0.165L/min、5.65±0.26mm，與灌胃對(duì)照組相比均P<0.0

7、5)。在連續(xù)7天給藥的基礎(chǔ)上術(shù)前4小時(shí)給予負(fù)荷劑量的阿托伐他汀進(jìn)一步下調(diào)ERK1/2磷酸化、NF-κB活性、TNF-α mRNA表達(dá)以及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(與他汀組相比均P<0.05)，且心功能進(jìn)一步獲得改善(他汀負(fù)荷組LVEF、FS、CO、LVEDd分別為79.99±4.26％、41.56±2.06％、0.153±0.014L/min、5.47±0.26mm，與他汀組相比均P<0.05)。 3.應(yīng)用PD98059抑制ERK1/2活性

8、獲得類似于阿托伐他汀的效益，即下調(diào)NF-κB的活化程度和TNF-α mRNA的表達(dá)水平，減少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(與CME組相比均P<0.05)，以及改善心功能(PD98059組LVEF、FS、CO、LVEDd分別為76.46±4.46％、39.47±2.26％、0.139±0.019L/min、5.65±0.31mm，與CME組相比均P<0.05)。但MIFmRNA的表達(dá)沒(méi)有明顯改變(PD98059組與CME組相比P>0.05)，推測(cè)MIF未