共軛亞油酸對人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2的作用.pdf

1、共軛亞油酸(Conjugatedlinoleicacid，CLA)是一組位置和幾何異構(gòu)體的十八碳共軛二烯酸的統(tǒng)稱。其雙鍵位于7,9；8，10；9，11；10，12；或11，13位置上，其中每個雙鍵又有順式和反式兩種構(gòu)型，即每個CLA的位置異構(gòu)體有四種不同的幾何異構(gòu)體。因此CLA可形成多種同分異構(gòu)體。 天然的CLA主要存在于反芻動物的奶、肉的脂肪中。最主要的CLA異構(gòu)體為c9,t11-CLA和t10,c12-CLA。牛瘤胃中c9，

2、t11-CLA是厭氧細(xì)菌溶纖維丁酸弧菌生物氫化亞油酸過程中的產(chǎn)物，此外還有一些細(xì)菌，如乳酸菌也可將亞油酸生物轉(zhuǎn)化為共軛亞油酸。 CLA有多種生物活性，如抗癌、減肥、抗動脈粥樣硬化、抗糖尿病和免疫調(diào)節(jié)等。近年來，對共軛亞油酸抗癌活性的研究引起了廣泛的注意。 Caco-2細(xì)胞是一類人結(jié)腸癌細(xì)胞，研究中建立了Caco-2細(xì)胞無血清培養(yǎng)的方法。研究了亞油酸(linoleicacid，LA，純度為96％)，c9，t11-CLA(純

3、度為96％)，t9，t11-CLA(純度為96％)，以及這兩種CLA的混合物(體積比為1：1)，在不同濃度(0，25，50，100，200μmol/L)、不同作用時間(1d，2d，3d，4d)下對Caco-2細(xì)胞增殖的影響以及相同濃度，相同作用時間下比較了四種物質(zhì)的活性。同時檢查了CLA混合物對Caco-2細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。 本研究采用MTT法分析CLA對Caco-2細(xì)胞增殖的抑制作用；通過透射電鏡觀察Caco-2細(xì)胞凋亡的形

4、態(tài)學(xué)變化，同時通過流式細(xì)胞儀定量檢測Caco-2細(xì)胞的凋亡率；采用RT-PCR的方法分析了在加入CLA的混合物后，Caco-2細(xì)胞caspase3mRNA的表達(dá)水平的變化。 研究結(jié)果表明，四種實(shí)驗(yàn)物質(zhì)在不同濃度、不同作用時間下均可抑制Caco-2細(xì)胞的增殖，其對Caco-2細(xì)胞增殖的抑制作用與作用時間(p＜0.05)和濃度有密切關(guān)系。在相同濃度、相同作用時間時，四種物質(zhì)對Caco-2細(xì)胞的抑制活性順序從大到小分別為：CLA異構(gòu)體

5、混合物，t9，t11-CLA，c9，t11-CLA，及LA。透射電子顯微鏡和流式細(xì)胞儀的結(jié)果表明，CLA混合物可誘導(dǎo)Caco-2細(xì)胞產(chǎn)生凋亡，并且與CLA混合物的濃度和作用時間呈依賴關(guān)系。RT-PCR的結(jié)果表明，隨著CLA的混合物濃度的增加，Caco-2細(xì)胞中caspase3mRNA的表達(dá)水平呈上升趨勢。 研究表明，LA、c9，t11-CLA和t9，t11-CLA和CLA混合物均可抑制Caco-2細(xì)胞的增殖，CLA的混合物活性最