同種異體骨髓基質細胞對急性心肌梗死的治療效應及其機制.pdf

1、目的：細胞移植指通過將合適的供體細胞移植到病變心肌，通過獨特的機制增加有功能的心肌細胞的數(shù)量并刺激毛細血管的生成以改善心肌血供，以期達到改善心功能的目的，是治療缺血性心臟病的新的有效方法，已成為研究熱點。骨髓基質細胞(Bonemarrowstromalcells，BMSCs)具有向肌細胞分化的潛能，是目前用于治療缺血性心臟病最有前途的細胞之一。但隨著年齡的增長，BMSCs的數(shù)量和增殖分化能力都較青年時期明顯下降。該問題限制了自體BMSC

2、s移植在臨床上的應用。本實驗在大鼠心肌梗死后，采用經心肌注射的方法，移植同種異體BMSCs，觀察移植細胞在體外能否誘導同種異體大鼠外周血單個核細胞(Peripheralbloodmononuclearcells，PBMCs)的增殖反應；在體內能否存活及進一步增殖分化；對受體心臟產生的影響及其作用機制，為臨床應用尋找理論依據(jù)。 方法：1.結扎大鼠冠脈左前降支制作急性心肌梗死模型，分離、培養(yǎng)BMSCs。體外實驗：建立BMSCs+同種

3、異體心肌梗死大鼠PBMCs以及BMSCs+同種異體PBMCs+PBMCs的混合培養(yǎng)體系，研究BMSCs能否刺激PBMCs的增殖反應，及其對PBMCs被刺激后產生的增殖反應的影響。體內實驗：將心肌梗死大鼠模型隨機分為2組。4周后，取傳兩代的體外培養(yǎng)的同種異體大鼠BMSCs，注射到大鼠心肌梗死區(qū)，為移植組。對照組僅接受培養(yǎng)基注射。移植4周后檢測受體心臟的血流動力學指標，然后取標本，檢測移植細胞存活、分化和組織的血管新生狀況。2.在心肌梗死及

4、細胞移植治療后的不同時期取標本動態(tài)觀察缺血心肌組織VEGF、bFGF的表達和血管新生狀況。3.將BMSCs在缺氧條件下培養(yǎng)24h后移植為缺氧移植組，比較缺氧培養(yǎng)后BMSCs胞內VEGF和Ⅷ因子表達的變化、以及該細胞對缺血心肌VEGF的表達和血管新生狀況的影響。 結果：1.同種異體BMSCs在體外未能刺激PBMCs的增殖反應，且對PBMCs被第三方抗原刺激的增殖反應有抑制作用；移植組大鼠心臟血流動力學指標較對照組明顯改善；同種異體

5、BMSCs移植入心肌梗死區(qū)后能夠度過急性炎癥期而且不引起明顯移植排斥反應；位于梗死區(qū)的移植細胞主要分化為成纖維細胞，部分位于心肌梗死區(qū)周圍的細胞分化為血管內皮細胞；移植組缺血心肌新生血管數(shù)目較對照組明顯增加(14±4.7/HPFVS6±2.4/HPFP＜0.05)。2.心肌梗死后，缺血心肌組織VEGF和bFGF的表達在梗死后7d達高峰，28d開始下降，第42和56d時表達明顯下降。而細胞移植組二者的表達在心肌梗死后第42d和56d明顯高

6、于對照組。3.體外培養(yǎng)的BMSCs經缺氧預處理后胞漿內VEGF蛋白、mRNA和Ⅷ因子蛋白的表達(0.17±0.025VS0.29±0.019，P＜0.01)明顯增加。缺氧移植組和移植組梗死區(qū)VEGF的表達和毛細血管密度較對照組明顯增加。缺氧移植組VEGF的表達和毛細血管密度又較移植組明顯增加。 結論：1.同種異體BMSCs具有極低的免疫原性，移植后可促進心肌梗死后血管新生、改善心功能，是用于心肌移植可供選擇的種子細胞；2.BMS