利用CRISPR-Cas9n系統(tǒng)對中腦多巴胺能神經(jīng)元進行特異性標(biāo)記.pdf

1、帕金森?。≒D）是一種較常見的、能給人類生活帶來嚴(yán)重影響的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，目前尚無法被根治。其主要病理標(biāo)志是中腦黑質(zhì)致密部（SNpc）表達酪氨酸羥化酶（TH）的多巴胺能神經(jīng)元漸進性消失。細(xì)胞治療是目前最有希望能顯著改善PD患者生存質(zhì)量的治療手段之一，在實現(xiàn)細(xì)胞治療前我們有必要對所能獲得的DP神經(jīng)元進行全方位的了解，盡管現(xiàn)在已經(jīng)建立起許多嚙齒類動物PD研究模型，并能體外誘導(dǎo)得到少量多巴胺（DP）神經(jīng)元用以研究，甚至能用人的特異性啟動子特異性

2、標(biāo)記小鼠DP神經(jīng)元，但目前仍未能標(biāo)記并獲得純的人類DP神經(jīng)元以便深入研究，阻礙了對人類PD的攻克和對DP神經(jīng)元的研究。
　　本文為了解決這一重要問題，在無異種動物源性培養(yǎng)條件下，結(jié)合最新、高效、便捷、成本較低且脫靶率更低的基因編輯系統(tǒng)——CRISPR/Cas9n系統(tǒng)，成功建立了攜帶體外克隆的TH短啟動子驅(qū)動的ZsGrenn基因的hES細(xì)胞系，并在由該細(xì)胞系誘導(dǎo)而來的DP神經(jīng)元中特異性表達熒光蛋白，實現(xiàn)了DP神經(jīng)元的特異性標(biāo)記，為接