小鼠后肢嚴(yán)重缺血治療的研究.pdf

1、第一部分內(nèi)皮干細(xì)胞體外培養(yǎng)時間不同對血管生成的影響. 背景:內(nèi)皮干細(xì)胞(EPcs)能夠經(jīng)不同的途徑被分離并在體外培養(yǎng)。然而，體外培養(yǎng)不同時間的內(nèi)皮干細(xì)胞對治療性血管生成的影響如何，卻仍不清楚。 方法與結(jié)果:通過手術(shù)造成裸鼠一側(cè)后肢缺血。隨機(jī)分組，每組小鼠16只。通過人外周靜脈血分離獲得的異源性EPCs經(jīng)體外培養(yǎng)不同時間后，移植入小鼠體內(nèi)。通過DNA分析法觀測EPCs的凋亡，免疫組織化學(xué)、激光多譜勒等方法對缺血組織中微血管

2、密度(MVD)、血流灌注等進(jìn)行觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與其它各組相比，體外培養(yǎng)12hr左右EPCs的凋亡率顯著降低；體外培養(yǎng)12hr左右EPCs治療組小鼠后肢缺血組織中的MVD、血流灌注顯著增高，患肢丟失率明顯降低。 結(jié)論:移植體外培養(yǎng)時間不同的EPcs將明顯影響其血管生成作用。與其它各組相比，體外培養(yǎng)12hr左右的EPCs能顯著增加缺血組織中血管生成和血流灌注，減少患肢丟失率。 第二部分EPCs和外周血單個核細(xì)胞生成血管作用的

3、比較. 背景:對細(xì)胞來源的解決是基于細(xì)胞的治療性血管生成的關(guān)鍵。外周血單個核細(xì)胞(PMNCs)不但來源充足，而且獲得時簡易、安全。若能以PMNCs替代EPCs治療肢體缺血，將非常有利于治療性血管生成在臨床推廣。因此，對PMNCs和EPCs的治療性血管生成療效進(jìn)行比較非常有意義。 方法與結(jié)果:動物模型的建立與第一部分相同。PMNCs和EPCs各自體外培養(yǎng)12hr左右后移植入小鼠體內(nèi)。檢測方法與第一部分相同。治療28d后，對

4、后肢缺血組織中的MVD，血流灌注，以及患肢丟失率進(jìn)行了觀察。結(jié)果顯示，PMNCs治療組和EPCs治療組問沒有顯著性差異。 結(jié)論:PMNCs的治療性血管生成作用和EPCs相似。 第三部分PMNCs聯(lián)合細(xì)胞因子基因和蛋白治療小鼠后肢嚴(yán)重缺血的研究. 背景:缺血組織中不但缺乏各種相關(guān)的細(xì)胞，亦缺乏各種相關(guān)的細(xì)胞因子。因此，聯(lián)合PMNCs和多種細(xì)胞因子治療肢體缺血是明智的。然而迄今為止，對PMNCs聯(lián)合多種細(xì)胞因子基因和

5、蛋白的治療性血管生成療效仍不十分清楚。 方法與結(jié)果:動物模型的建立與第一部分相同。利用基因重組技術(shù)將目的基因置入腺病毒載體。將PMNCs和/或血管內(nèi)皮生長因子165(VEGF165)基因和/或蛋白，以及血管生長素-1(Ang-1)基因和/或蛋白，分別或聯(lián)合移植入小鼠體內(nèi)。應(yīng)用Northem blot和Westem blot檢測缺血組織中目的基因及其蛋白的表達(dá)水平；余法同第一部分。結(jié)果顯示，治療28d后，PMNCs聯(lián)合VEGF16

6、5基因和蛋白治療組缺血組織中VEGF165基因或蛋白的表達(dá)水平，與A組中其他各亞組相比顯著增高；與之相對應(yīng)，缺血組織中的MVD和血流灌注亦顯著增高，患肢丟失率顯著減少。PMNCs聯(lián)合Ang-1基因和蛋白治療組缺血組織中Ang-1基因或蛋白的表達(dá)水平，與B組中其他各亞組相比顯著增高；與之相對應(yīng)，缺血組織中的MvD和血流灌注亦顯著增高，患肢丟失率顯著減少。然而，與PMNCs聯(lián)合vEGF165基因和蛋白治療組，以及PMNCs聯(lián)合Ang-1基因