線(xiàn)粒體靶向多肽SS-31對(duì)小鼠后肢缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：
　　1、探討線(xiàn)粒體靶向多肽Szeto-Schiller(SS)-31(D-Arg-dimethylTyr-Lys-Phe-NH2)在后肢缺血再灌注損傷的小鼠模型中能否起到保護(hù)作用，并比較預(yù)防性和治療性使用SS-31在后肢缺血再灌注損傷小鼠模型的保護(hù)作用方面是否存在差異性;
　　方法：
　　1、利用口腔正畸橡皮筋結(jié)扎B6小鼠左股骨大轉(zhuǎn)子1.5h后去除橡皮筋8小時(shí)建立后肢缺血再灌注模型;
　　2、給藥方式:預(yù)

2、防組:橡皮筋結(jié)扎小鼠左股骨大轉(zhuǎn)子前30分鐘腹腔分別注射生理鹽水或SS-31(5mg/kg);治療組:去除橡皮筋前30分鐘腹腔分別注射生理鹽水或SS-31(5mg/kg);
　　3、應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法(western blot)分別檢測(cè)不同分組中過(guò)氧化氫酶(catalase)、錳-超氧化物歧化酶(Manganese-dependent Superoxide Dismutase，Mn-SOD)、線(xiàn)粒體細(xì)胞色素C(Mitochondria

3、l Cytochrome C，Mito Cyt C)、細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞色素C(Cytoplasm Cytochrome C，Cyto Cyt C)、腫瘤壞死因子α(Tumor Necrosis Factorα，TNF-α)、白細(xì)胞介素1β(Interleukin1β，IL-1β)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2Associated X Protein，BAX)、b細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2，B

4、cl-2)、未活化型半胱天冬酶3(Pro-Caspase3，Pro-CP3)和活化型半胱天冬酶3(Cleaved-Caspase3，CCP3)的蛋白表達(dá)量;應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)丙二醇(Malondialdehyde，MDA)的含量;應(yīng)用酶標(biāo)儀檢測(cè)過(guò)catalase和Mn-SOD的酶活性;應(yīng)用熒光素酶法檢測(cè)腺嘌呤核瞢三磷酸(Adenosine Triphosphate，ATP)含量;應(yīng)用陽(yáng)離子脂質(zhì)熒光染料JC-1法檢測(cè)線(xiàn)粒體膜

5、電位(Mitochondrial Membrane Potential，MMP)，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析各組中上述數(shù)據(jù)的差異性，結(jié)合病理組織的蘇木精—伊紅染色圖（Hematoxylin-Eosin staining，HE染色）和線(xiàn)粒體電鏡圖綜合評(píng)價(jià)SS-31在小鼠后肢缺血再灌注損傷的模型中能否起到保護(hù)作用，并比較預(yù)防性和治療性使用SS-31在后肢缺血再灌注損傷小鼠模型的保護(hù)作用方面是否存在差異性。
　　結(jié)果：
　　1.SS-31

6、無(wú)論預(yù)防性還是治療性給藥都能減少缺血再灌注肌肉組織中炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，減輕肌纖維的變性壞死，有一定的保護(hù)作用。
　　2.SS-31能夠減少脂質(zhì)過(guò)氧化MDA的產(chǎn)生并且提高抗氧化酶Mn-SOD和catalase的蛋白表達(dá)量和酶活性，從而提高肌肉組織的抗氧化能力。
　　3.電鏡所示SS-31能夠更好的保持線(xiàn)粒體結(jié)構(gòu)的完整性，檢測(cè)指標(biāo)也顯示，SS-31能有效保護(hù)線(xiàn)粒體的功能。
　　4.肌肉組織的炎癥反應(yīng)在SS-31的處理下得到了