鋅離子對重組大腸桿菌P84AMC1061表達鹵醇脫鹵酶的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、本文主要針對鋅離子在基因工程大腸桿菌表達鹵醇脫鹵酶過程中的重要影響進行了系統(tǒng)研究。
　　首先,通過搖瓶實驗顯著篩選出影響鹵醇脫鹵酶表達的金屬離子——Zn2+,并確定其最優(yōu)濃度為0.7mg/L;
　　其次,在50L罐中進行了上述搖瓶實驗結(jié)果的放大研究,探索了分批發(fā)酵過程中鋅離子的最佳添加時機和濃度,對動態(tài)變化數(shù)據(jù)進行分析發(fā)現(xiàn):鋅離子不僅可顯著提高大腸桿菌的生理活性、比生長速率和營養(yǎng)物質(zhì)消耗速率,還能有效提高鹵醇脫鹵酶的表達以及

2、酶的純度,在此基礎(chǔ)上篩選出最優(yōu)鋅離子添加策略( pdr4),發(fā)酵開始時加入0.35mg/LZn2+,對數(shù)生長期快結(jié)束時(約8h)加入0.35mg/L,此策略下相比對照組,最大比酶活和最大酶活分別提高5.42％和9.8%;
　　第三,對 L-阿拉伯糖和 Zn2+的協(xié)同調(diào)節(jié)作用進行了關(guān)聯(lián)研究,研究發(fā)現(xiàn):添加鋅離子的情況下,L-Ar添加含量為1‰時最佳,鹵醇脫鹵酶可以較好地積累和表達,而過量添加的 L-Ar主要作為碳源參與菌體體內(nèi)的磷酸