鐵離子對大腸桿菌外膜蛋白OmpW的調(diào)控機制研究.pdf

1、先天免疫是機體對抗大部分細菌的主要免疫系統(tǒng)，而先天免疫防御最有效的策略就是控制體液中的鐵。同時，鐵也是細菌毒力和致病性的關(guān)鍵調(diào)控因子，細菌毒力及其致病性取決于其從宿主體內(nèi)獲取鐵的能力。但目前對鐵調(diào)控細菌毒力的分子機制并未完全闡明。近年發(fā)現(xiàn)廣泛存在于革蘭氏陰性細菌的外膜孔蛋白OmpW為一多功能蛋白，它不僅促進細菌耐受多種不利環(huán)境，也促進細菌抗先天性免疫作用，與細菌毒力及致病性相關(guān)，而且研究表明OmpW的表達量的變化與鐵離子有關(guān)，但目前鐵調(diào)

2、控OmpW的詳細機制尚未闡明。
　　本研究首先通過Western blotting發(fā)現(xiàn)，在不同鐵離子濃度下OmpW的表達發(fā)生改變，證實OmpW受鐵離子調(diào)控。進而通過構(gòu)建重組載體pACYC184-ompW，并轉(zhuǎn)化ompW基因敲除菌（ΔompW）得到ompW基因補救菌（+ompW）。經(jīng)菲洛嗪洛比色法分析正常菌、ΔompW和+ompW攝取鐵離子差異，表明ΔompW菌攝入的鐵離子較多，而K12和+ompW對鐵離子的攝入較少，推測OmpW可

3、能與鐵離子攝取有關(guān)。此外，利用Real-Time qPCR檢測正常和限鐵條件下轉(zhuǎn)錄因子的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)限鐵下轉(zhuǎn)錄因子Fur表達量下調(diào)，而SoxS沒有明顯改變，表明Fur可能參與鐵對OmpW的調(diào)控。為進一步確定轉(zhuǎn)錄因子的作用，運用載體pET-28a(+)構(gòu)建了轉(zhuǎn)錄因子的高表達菌，然后利用Real-Time qPCR和Western blotting檢測OmpW的表達情況，發(fā)現(xiàn)Fur高表達菌中OmpW的表達量上調(diào)，而SoxS高表達菌中Omp