PPARδ與GATA家族相互作用影響P19CL6細胞分化的研究.pdf

1、研究背景與目的:
　　過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator activated receptors，PPARs)是核受體超家族成員之一，有α、β/δ和γ三個亞型。研究表明PPARδ在動脈粥樣硬化、細胞發(fā)育和心肌能量代謝過程中發(fā)揮重要作用，PPARδ(-/-)基因敲除小鼠，出現(xiàn)心臟脂代謝紊亂，誘發(fā)心臟脂毒性。GATA家族是具有鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子，目前已知有6個家族成員，因其識別序列（A/T）GA

2、TA(A/G)而得名，調(diào)節(jié)多種細胞的生長、分化和存活，對于維持機體的功能發(fā)揮著重要作用。我室已有的研究表明，PPARα與GATA6相互作用協(xié)同激活心肌能量代謝關鍵基因Glut4的表達，進而影響心肌的能量代謝。在心肌細胞分化過程中心肌的能量代謝會發(fā)生變化，基于同一家族成員蛋白分子之間結(jié)構(gòu)和功能方面的相似性，我們推測PPARδ是否也可以和GATA家族中的GATA4、GATA6相互作用來影響細胞的分化？
　　研究方法:
　　(1)

3、誘導分化實驗通過誘導分化實驗觀察PPARδ、GATA4、GATA6單獨或者共轉(zhuǎn)染P19CL6細胞時，對細胞分化的影響。
　　(2) CO-IP（蛋白質(zhì)免疫共沉淀）實驗驗證PPARδ與GATA4、GATA6在細胞內(nèi)是否存在生理性的結(jié)合。
　　(3)通過transfection（瞬時轉(zhuǎn)染）來驗證PPARδ與GATA4、GATA6的相互作用對心肌細胞標志基因α-MHC啟動子活性的影響。
　　結(jié)果:
　　(1)誘導分化實

4、驗結(jié)果表明PPARδ、GATA4、GATA6單獨作用時能明顯促進P19CL6細胞向心肌細胞的分化，而P19CL6細胞共表達PPARδ和GATA4、PPARδ和GATA6時，對細胞分化的協(xié)同促進作用并不明顯甚至抑制了P19CL6細胞向心肌細胞的分化。
　　(2)蛋白免疫共沉淀實驗結(jié)果表明PPARδ與GATA4、GATA6在體內(nèi)存在生理性的相互結(jié)合。
　　(3)瞬時轉(zhuǎn)染實驗結(jié)果表明PPARδ與GATA4、GATA6對心肌標志基因