肝細(xì)胞癌中關(guān)鍵基因與microRNA的交互作用分析及EDNRB基因?qū)Ω伟┘?xì)胞的作用研究.pdf

1、第一部分、肝細(xì)胞癌中關(guān)鍵基因與microRNA的鑒別和交互作用的生物信息學(xué)分析目的：鑒別促進HCC發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵基因和miRNA及其潛在的分子機制。
　　方法：
　　從GEO數(shù)據(jù)庫分別下載包含mRNA和miRNA表達(dá)譜的微陣列數(shù)據(jù)集GSE22058，GSE25097和GSE57958，并使用GEO2R進行癌及癌旁組織基因差異性分析。使用DAVID數(shù)據(jù)庫對差異基因進行功能和通路富集分析。使用Cytoscape軟件構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)

2、。最后，使用miRDB預(yù)測差異表達(dá)的microRNA的靶基因。
　　結(jié)果:
　　通過分析得到115個DEGs，其中包括52個上調(diào)基因和63個下調(diào)基因。功能和通路富集分析提示上調(diào)基因主要富集于染色體分離和細(xì)胞分裂過程，而下調(diào)基因主要參與補體激活、蛋白激活級聯(lián)、羧酸代謝過程、含氧酸代謝過程及免疫反應(yīng)。通過PPI網(wǎng)絡(luò)分析篩選18個核心基因，其中ESR1與FOXO1、CXCL12和GNAO1具有密切的相互作用。同時，分析得到64個D

3、EMs，其中hsa-mir-18a和hsa-mir-221等5種miRNA可能對ESR1有靶向調(diào)控作用。
　　結(jié)論:
　　ESR1及CXCL12等DEGs與has-mir-221等DEMs的相互作用可能在HCC的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，這可能為HCC患者的診斷和治療提供新的線索。
　　第二部分、EDNRB基因?qū)Ω伟┘?xì)胞株SMMC-7721及Huh7的遷移和侵襲能力的影響目的:探討EDNRB基因?qū)θ烁伟┘?xì)胞遷移及侵襲能力的

4、影響。
　　方法:
　　應(yīng)用實時熒光定量PCR和Western blot法檢測EDNRB基因mRNA和蛋白在人肝癌細(xì)胞株（SMMC-7721和Huh7），人肝細(xì)胞株LO2以及HCC組織及其癌旁的相應(yīng)組織中的表達(dá)情況。通過慢病毒轉(zhuǎn)染構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)EDNRB基因的細(xì)胞株SMMC-7721-E和Huh7-E，應(yīng)用CCK-8法及Transwell小室法分別檢測EDNRB基因?qū)Ω伟┘?xì)胞增殖、遷移及侵襲能力的影響。
　　結(jié)果:

5、r>　　EDNRB mRNA在SMMC-7721和Huh7細(xì)胞中低于LO2細(xì)胞；HCC組織中EDNRB mRNA的表達(dá)水平低于相匹配的癌旁組織（P＜0.01）。SMMC-7721和Huh7細(xì)胞中EDNRB蛋白表達(dá)低于LO2細(xì)胞；HCC組織中EDNRB蛋白的表達(dá)低于其相匹配的癌旁組織（P＜0.01）。EDNRB基因過表達(dá)對SMMC-7721和Huh7細(xì)胞的增殖無顯著影響（p值均＞0.05），但能抑制其遷移和侵襲（p值均＜0.01）。