As2O3對體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞增殖與凋亡及BMP-2基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察不同劑量三氧化二砷對體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞形態(tài)特征的影響;檢測不同劑量三氧化二砷對成骨細(xì)胞增殖與凋亡的影響及其BMP-2基因表達(dá)的影響,以期從基因水平上探討三氧化二砷對成骨細(xì)胞的作用機(jī)制,為砷的毒理作用和應(yīng)用藥理學(xué)的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:不同濃度(100μmol/L、10μmol/L、1μmol/L、0.1μmol/L)的三氧化二砷作用于體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞后,進(jìn)行如下檢測:倒置顯微鏡觀察成骨細(xì)胞的形態(tài):MTT法檢測

2、成骨細(xì)胞的增殖:AnnexinV-FITC雙染法和TUNEL法檢測成骨細(xì)胞的凋亡:RT-PCR檢測成骨細(xì)胞BMP-2基因的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:①形態(tài)學(xué)觀察顯示:100μmol/L組成骨細(xì)胞出現(xiàn)核溶解、胞質(zhì)空泡化現(xiàn)象,無法分辨細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核,10μmol/L組可見部分成骨細(xì)胞變圓變小,細(xì)胞核固縮、碎裂,細(xì)胞膜皺褶、凹陷;1μmol/L組成骨細(xì)胞數(shù)目眾多和分裂相明顯;0.1μmol/L組成骨細(xì)胞間連接緊密。②MTT法結(jié)果顯示:1

3、00μmol/L和10μmol/L組OD值明顯低于對照組,且72hOD值低于48hOD值,統(tǒng)計(jì)學(xué)比較有顯著性差異(P＜0.01):1μmol/L組OD值明顯高于對照組,且72hOD值高于48hOD值,統(tǒng)計(jì)學(xué)比較有顯著性差異(P＜0.01);0.1μmol/L組72hOD值與48hOD值比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),且OD值與對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。③AnnexinV-FITC/PI雙染法和TUNEL法結(jié)果均顯示:與對

4、照組凋亡率(8.13％、12.12％)比較,10μmol/L組凋亡率(21.6％、18.4％)升高,有顯著性差異(P＜0.01);1μmol/L組凋亡率(5.27％、9-35％)下降,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);0.1μmol/L組凋亡率(7.86％、10.26％)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。④RT-PCR結(jié)果顯示:10μmol/L組72hBMP-2基因表達(dá)(0.15±0.03)明顯低于48hBMP-2基因表達(dá)(0.31±0.11)

5、,且BMP-2的表達(dá)明顯低于對照組(0.86±0.13、0.84±0.08),統(tǒng)計(jì)學(xué)比較有顯著性差異(P＜0.01);1μmol/L組72hBMP-2基因表達(dá)(0.84±0.06)與48hBMP-2基因表達(dá)(0.81±0.22)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),且BMP-2基因表達(dá)與對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);0.1μmol/L,組72hBMP-2基因表達(dá)(4.49±0.19)明顯高于48hBMP-2基因表達(dá)(1.29±0.