六味地黃湯醇溶部位免疫活性成分研究多糖構(gòu)效關(guān)系的初步研究.pdf

1、本文分兩部分，第一部分是六味地黃湯醇溶部位免疫活性成分研究。 在活性導(dǎo)向下，以溶血空斑試驗(yàn)(PFC)免疫活性評價指標(biāo)，對中醫(yī)經(jīng)典名方六味地黃湯的醇溶部位進(jìn)行了免疫活性成分追蹤分離。結(jié)果得到Fr1-3A和Fr1-4C18-A兩個主要活性部位，并從中分離得到Fr1-3A(3)a、Fr1-3A(3)b、Fr1-3A(4)和Fr1-4C18-A(2)四個單體化合物. 活性評價結(jié)果表明：1.在各分離部位中，F(xiàn)r1-3A和Fr1-4

2、C18-A的活性較強(qiáng)，得率較高，為主要活性部位。2.單體化合物Fr1-4C18-A(2)對Cy處理小鼠脾細(xì)胞抗體生成反應(yīng)能力低下具有明顯的改善作用；Fr1-3A(4)對SAMP8脾細(xì)胞增殖反應(yīng)具有明顯的改善作用；Fr1-3A(3)b體外在低濃度時對正常小鼠脾細(xì)胞自發(fā)和ConA誘導(dǎo)的增殖反應(yīng)具有明顯促進(jìn)作用，隨濃度增加則為抑制。提示這三個單體化合物可能為主要的免疫調(diào)節(jié)活性成分。 采用現(xiàn)代串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，結(jié)合13C-NMR和1H-NM

3、R，鑒定了Fr1-3A(3)a、Fr1-3A(3)b、Fr1-3A(4)和Fr1-4C18-A(2)的結(jié)構(gòu)，分別為獐牙菜甙(sweroside)、莫諾甙(morroniside)、馬錢素(loganin)和甘露三糖(manninotriose)。同時也一并鑒定了樣品中所含的其它微量成分。 第二部分是多糖構(gòu)效關(guān)系的初步研究。 從山茱萸中分離得到六個分子量均一的多糖，并對其中四個多糖(Cop-2c、Cop-3a、Cop-3b

4、和Cop-3c)進(jìn)行了結(jié)構(gòu)研究，初步闡明了它們的結(jié)構(gòu)特征。HPLC分析表明，它們的分子量分別為20000，24000，10000和17000Dal。糖組成分析表明，除了少量的蛋白質(zhì)外，它們均主要含半乳糖醛酸(GalA)以及鼠李糖(Rha)。甲基化分析表明，它們中的半半乳糖醛酸(GalA)以及鼠李糖(Rha)。甲基化分析表明，它們中的半乳糖醛酸(GalA)主要以1→4位相連接。樣品Cop-3b中GalA含量最高，達(dá)95％以上。其余3種多糖

5、，中性糖含量較高，約占40～50％，其中，鼠李糖含量較高，多以1→2位連接，少數(shù)3位或4位有分支，而半乳糖(Gal)多以末端相連。所以，這些多糖可能是以鼠李糖半乳糖醛酸(rhamnogalacturonan)骨架片段組成的果膠類酸性雜多糖。1H-和13C-NMR分析表明，Cop-2c、Cop-3b和Cop-3c中的GalA和Rha端基碳原子是α構(gòu)型。用HPLC法測定了另外兩個多糖Cop-4b和Cop-4c的分子量，分別為32000和22

6、500Dal。1H-和13C-NMR波譜表明，它們中的GalA和Rha端基碳原子也是α構(gòu)型。體外活性評價表明，六個多糖對LACA小鼠脾淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化均具有一定的促進(jìn)作用。其中，來源于CTAB-Ppt部分的多糖Cop-4a對LACA小鼠脾淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化表現(xiàn)出顯著的促進(jìn)作用。 從山藥中分離得到兩個多糖S1和S2。HPLC分析顯示它們?yōu)榫环肿樱肿恿糠謩e為63000和7400Dal。全水解產(chǎn)物的分析表明，它們的糖組成均為葡萄糖。1H

7、-NMR和13C-NMR分析表明，它們中的葡萄糖以1→4方式連接，都是[α-Glc1→4-]n型葡聚糖。 用2MTFA和pectinase對六味地黃活性多糖CA4-3分別進(jìn)行了酸水解和酶解，獲得了九個降解片段。測定了主要片段H1的分子量和結(jié)構(gòu)特征。體外對LACA小鼠脾細(xì)胞增殖反應(yīng)的活性評價結(jié)果表明，CA4-3的適當(dāng)降解片段仍有活性，分子量大的片段較分子量小的活性好，且較原活性多糖高。提示酸性多糖的活性有隨糖醛酸比例增高而增強(qiáng)的趨