滋陰藥地黃活性成分梓醇神經(jīng)保護(hù)作用研究.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性記憶和認(rèn)知功能障礙.患者發(fā)生最早也最重要的病理改變是基底前腦膽堿能神經(jīng)元的變性、丟失,膽堿能標(biāo)志物膽堿乙酰基轉(zhuǎn)移酶 (cholineacetyl-transferase,CHAT)活性降低,神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿 (acetylcholine,ACh)釋放減少,受體功能異常,因此改善膽堿神經(jīng)元的功能對(duì)AD的治療有重要意義.目前臨床對(duì)AD的

2、藥物治療主要是使用膽堿酯酶抑制劑和M受體激動(dòng)劑對(duì)癥治療改善輕、中度AD患者癥狀,對(duì)重度患者效果甚微,且長(zhǎng)期療效差,副作用嚴(yán)重,尋找和開(kāi)發(fā)治療AD的安全有效藥物一直是AD研究的重要方向. 中醫(yī)對(duì)AD等記憶障礙性疾病有獨(dú)到的見(jiàn)解,認(rèn)為本病患者多為腎陰虛證,因此滋陰藥在治療AD的方劑中常用,其中知母和地黃最常用到.多年來(lái)我們科室對(duì)知母抗 AD 活性成分知母皂苷元(sarsasapogenin,ZMS)及其 25 位異構(gòu)體異菝葜皂苷元

3、(smilagenin,SMI)的神經(jīng)保護(hù)作用及作用機(jī)制進(jìn)行了系統(tǒng)的研究.地黃抗AD的活性成分尚不明確,其活性成分以環(huán)烯醚萜類(lèi)為主,而梓醇在地黃環(huán)烯醚萜類(lèi)中含量最高,是中國(guó)藥典指定的地黃質(zhì)量鑒定指標(biāo).近年來(lái)梓醇的神經(jīng)保護(hù)作用研究較多. 本課題在動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,從細(xì)胞水平進(jìn)一步觀察了梓醇的膽堿神經(jīng)保護(hù)作用,并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行了初步探討.放射配基結(jié)合分析研究結(jié)果表明,梓醇終濃度1×10<'-5>mol/l、1×10<'-4>

4、mol/l能上調(diào)衰老CHOm2細(xì)胞和L-Glu損傷PC12細(xì)胞下降的M受體密度,卻不影響膽堿酯酶活性,也不與M受體位點(diǎn)結(jié)合；對(duì)Aβ<,25-35>損傷神經(jīng)元樣PC12細(xì)胞制作的AD細(xì)胞模型,MTT分析發(fā)現(xiàn)梓醇能增加其存活率,免疫細(xì)胞化學(xué)和放射酶分析測(cè)定ChAT活性、RT-PCR分析ChAT mRNA表達(dá)等方法檢測(cè)結(jié)果顯示梓醇對(duì)模型細(xì)胞降低的ChAT活性及ChAT mRNA表達(dá)有改善作用,終濃度達(dá)1×10<'-4>mol/1時(shí)神經(jīng)保護(hù)作用

5、顯著.提前1h加入神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子高親和力受體trk的特異性阻斷劑K252a干預(yù)梓醇的作用,發(fā)現(xiàn)其膽堿神經(jīng)保護(hù)作用減弱,但沒(méi)有完全消失,說(shuō)明梓醇的作用部分通過(guò)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子途徑實(shí)現(xiàn)；針對(duì)Ap<,25-35>毒性作用以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡為主,而梓醇對(duì)其毒性有對(duì)抗作用,進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)用TUNEL法測(cè)細(xì)胞凋亡率、RT-PCR測(cè)凋亡相關(guān)因子Bax、Bcl-2的mRNA表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn)梓醇1×10<'-4>mol/l有明顯抗Aβ<,25-35>誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋

6、亡作用,提示梓醇膽堿神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制與其抗細(xì)胞凋亡作用有關(guān). 上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明梓醇具有明顯膽堿神經(jīng)保護(hù)作用,其與目前臨床所用藥物不同之處在于,既不是膽堿酯酶抑制劑,又不是M受體激動(dòng)劑或阻斷劑,很可能成為一類(lèi)新的抗AD藥物.從研究結(jié)果來(lái)看,梓醇作用較弱,終濃度達(dá)到1×10<'-4>mol/l才對(duì)細(xì)胞有顯著的改善作用,且臨床用藥以熟地黃滋陰作用更強(qiáng),而熟地黃中梓醇含量明顯減少,有些梓醇結(jié)構(gòu)類(lèi)似物含量卻明顯增加,推測(cè)某些梓醇結(jié)構(gòu)類(lèi)似物