提高周血血管生成素1水平對造血干祖細胞的動員效應研究.pdf

1、目的:
　　造血干細胞移植(HSCT)是治療白血病、淋巴瘤等惡性血液腫瘤、代謝性疾病、自身免疫性疾病等危害人類健康的最有效方法之一。動員足夠的造血干/祖細胞(HSPC)從骨髓到外周血是進行外周血造血干細胞移植治療的前提。目前各種細胞因子如粒細胞集落刺激因子(G-CSF)、化療試劑以及趨化因子已廣泛應用于HSPC動員，但是動員的HSPC仍不能滿足臨床治療，而且HPSC動員機制尚未完全闡明，因此有必要對HSPC動員機制進行深入研究，才

2、能開發(fā)更有效的動員試劑，更深入地理解HSPC動員的分子機制。
　　方法:
　　本研究以腺病毒為載體，通過合成基因重組血管生成素1(Ang1)腺病毒，以C57BL/6小鼠為研究對象，予小鼠尾靜脈注射重組腺病毒，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、流式細胞術(shù)、血細胞計數(shù)、造血祖細胞集落培養(yǎng)等實驗方法檢測注射重組Ang1腺病毒及空白載體的小鼠周血，觀察注射腺病毒后小鼠周血血清中Ang1濃度、Lin-Sca-1+c-kit+(LSK

3、)細胞比例、白細胞數(shù)以及集落形成單位(CFU)的變化，研究提高周血Ang1濃度對HSPC的動員效應。
　　結(jié)果:
　　1、所包裝的重組腺病毒的滴度為1010pfu/ml;重組腺病毒轉(zhuǎn)染293T細胞后，熒光基因GFP能夠正常表達，培養(yǎng)上清含Ang1蛋白。
　　2、注射重組Ang1腺病毒后，小鼠周血血清Ang1的濃度呈逐步升高，至d14上升較快，d14、d21、d28、d35、d42較d0均明顯升高，差別有統(tǒng)計學意義(P＜

4、0.05);注射重組Ang1腺病毒后，小鼠骨髓液Ang1的濃度變化不明顯，d1-d28均在基線值上下徘徊，d35、d42較基線值升高，d42與d0對比明顯升高(P＜0.05)。
　　3、注射重組Ang1或空病毒腺病毒后，周血白細胞均升高，以注射PSC組(d0)小鼠周血WBC作為基線值（5.38±2.32）×109/L，注射重組Ang1腺病毒后小鼠周血WBC升高，至d14處于最高點(13.07±1.26)×109/L(P=0.02)

5、，d7-d42均較d0高(P＜0.05)，但至d42時仍沒有將至基線值;注射陰性對照病毒，小鼠周血WBC也上升，d28達峰值（13.52±3.00）×109/L(P=0.021)，d7-d35均較d0高(P＜0.05)，d42增高不明顯(P=0.698)。
　　4、注射不同重組腺病毒后對小鼠有無動員效應，流式細胞術(shù)檢測LSK細胞占有核細胞的比例，注射PBS組(d0)即基線值為(0.0561±0.013)％，注射重組Ang1腺病毒組

6、，d14處于最高值，d7-d21均較d0組升高(P＜0.05);注射空腺病毒后，d10達到最高值(0.1071±0.026)％，d10-d21均較d0升高(P＜0.05)。注射重組Ang1腺病毒與空腺病毒同一時間點比較，Ab-Ang1d10、d14、d21 LSK細胞占有核細胞的比例均較Ab-CTL的高(P＜0.05)。
　　5、取了d14時間點，行造血祖細胞培養(yǎng)，注射重組Ang1腺病毒實驗組克隆形成單位(CFU)為8.16±4.