血管生成素-1基因修飾內(nèi)皮祖細(xì)胞移植在損傷血管內(nèi)皮修復(fù)中的作用研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:體外培養(yǎng)大鼠血管生成素-1(Angiopoeitin-1,Ang-1)基因修飾內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cell,EPC),即(Ang-1-EPCs)。構(gòu)建股動(dòng)脈球囊損傷的大鼠模型。探討Ang-1基因修飾的EPCs對(duì)大鼠急性球囊損傷動(dòng)脈血管的修復(fù)作用。
   方法:大鼠股動(dòng)脈經(jīng)球囊損傷后2天,掃描電鏡觀察其內(nèi)皮損傷情況。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分三組:對(duì)照組、單純損傷組、細(xì)胞移植組;細(xì)胞移植組包括EPCs移

2、植組(n=16),PNL-EPCs移植組(n=16)及Angl-EPCs移植組(n=16)。通過(guò)血管外膜下直接注射移植基因修飾的EPCs。2周時(shí)處死部分動(dòng)物取出股動(dòng)脈組織并收集外周血,流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定CD34陽(yáng)性細(xì)胞比例,評(píng)價(jià)其骨髓動(dòng)員的程度。ELISA檢測(cè)各組血清Ang-1的含量,HE染色檢測(cè)各組動(dòng)脈內(nèi)膜/中層比差別,PCNA免疫組化觀察平滑肌細(xì)胞增殖效應(yīng),Real-Time PCR定量分析股動(dòng)脈組織中Ang-1/Tie-2的mRNA

3、含量;4周時(shí)取股動(dòng)脈組織,熒光顯微鏡觀察EGFP(+)細(xì)胞,Ⅷ因子免疫熒光觀察Ang-1-EPCs的分化情況。
   結(jié)果:
   1.大鼠股動(dòng)脈球囊損傷模型建立:經(jīng)球囊損傷后,掃描電鏡觀察有明顯內(nèi)皮剝脫。在單純球囊損傷組,2周石臘切片HE染色見(jiàn)明顯的新生內(nèi)膜增殖,血管腔明顯變狹窄。PCNA組化染色發(fā)現(xiàn)中膜和新生內(nèi)膜有較多PCNA陽(yáng)性細(xì)胞;
   2.基因修飾EPCs移植對(duì)新生內(nèi)膜的增生程度的影響:經(jīng)EPC移植干

4、預(yù)后,中膜和新生內(nèi)膜中PCNA陽(yáng)性細(xì)胞比例減低,其中Ang-1-EPCs減低最明顯,提示Ang-1修飾的EPCs移植干預(yù)有抑制大鼠球囊損傷血管后新生內(nèi)膜增殖的效果;
   3.基因修飾EPCs移植對(duì)損傷血管內(nèi)皮修復(fù)的作用:Ang-1-EPCs明顯上調(diào)外周血中CD34陽(yáng)性細(xì)胞比例(P<0.05)及Ang-1含量(P<0.05);且Ang-1-EPCs移植組股動(dòng)脈組織中Ang-1的mRNA含量也明顯上升:4周時(shí),Ⅷ因子免疫熒光提示E

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