過表達IDH1R132H對膠質(zhì)細胞瘤細胞生長的影響及其機制研究.pdf

1、目的:研究IDH1R132H對GBM細胞增殖、遷移和侵襲能力的影響，并探索其相關(guān)的分子機制，為GBM的個體化治療提供更充分的實驗室證據(jù)和可能的治療靶點。
　　方法:構(gòu)建穩(wěn)定過表達IDH1R132H的U87 GBM細胞系，并通過Western blot驗證。通過CCK-8實驗檢測過表達IDH1R132H對U87細胞增殖的影響，通過劃痕實驗檢測過表達IDH1R132H對U87細胞遷移能力的影響，通過Transwell實驗檢測過表達ID

2、H1R132H對U87細胞侵襲能力的影響。分析TCGA數(shù)據(jù)庫中IDH1R132H GBM中miR-128a的表達水平，Real-time PCR檢測過表達IDH1R132H的U87細胞中miR-128a的表達水平。通過Western blot分析HIF-1α在過表達IDH1R132H的U87細胞中的表達水平，并且使用HIF-1α抑制劑處理IDH1R132H U87細胞觀察其對miR-128a表達水平的影響，分析miR-128a基因啟動子

3、序列并通過Chip實驗分析IDH1R132H U87細胞中HIF-1α和miR-128a的結(jié)合情況。采用miR-128amimics或miR-128a inhibitor干預U87細胞，通過CCK-8實驗檢測miR-128a對IDH1R132H U87細胞以及IDH1wT U87細胞增殖的影響，通過Real-time PCR和Western blot檢測Bmi-1在IDH1R132H U87細胞、miR-128amimics和miR-1

4、28a inhibitor干預的U87細胞中的表達水平，通過Luciferase實驗檢測miR-128a與Bmi-1 mRNA3'-UTR的結(jié)合情況。通過Western blot分析p-Akt、Total Akt、p-FAK、MMP-9蛋白在miR-128amimics和miR-128a inhibitor干預的U87細胞中的表達水平。通過流式細胞術(shù)分析miR-128a mimics和miR-128a inhibitor干預的U87細胞

5、的凋亡水平以及細胞周期變化。
　　結(jié)果:建立了穩(wěn)定過表達IDH1R132H的U87 GBM細胞系。與對照組和IDH1WT組相比，過表達IDH1R132H的U87細胞出現(xiàn)增殖減緩、遷移和侵襲能力下降(P＜0.05)。HIF-1α在過表達IDH1R132H的U87細胞中表達升高(P＜0.05)，Chip實驗證實HIF-1α能夠結(jié)合在miR-128a啟動子的HRE(P＜0.01)。與IDH1 WT GBM相比，miR-128a在IDH1

6、R132H GBM中呈現(xiàn)高表達(P＜0.01)，體外細胞實驗發(fā)現(xiàn)miR-128a能夠抑制細胞增殖(P＜0.01)，推測IDH1R132H通過誘導miR-128a的表達而抑制U87細胞增殖。miR-128a能夠靶向作用于Bmi-1的3'-UTR區(qū)(P＜0.05)，負性調(diào)節(jié)Bmi-1的表達(P＜0.05)。Western blot分析顯示miR-128a能夠負性調(diào)節(jié)p-Akt、p-FAK、MMP-9的表達水平。流式細胞術(shù)檢測結(jié)果提示miR-