血管內皮生長因子-磺化殼聚糖多層膜改性鈦表面的研究.pdf

1、第一部分鈦表面血管內皮生長因子/磺化殼聚糖多層膜的構建
　　目的:構建鈦—血管內皮生長因子/磺化殼聚糖（VEGF/SCS）多層膜，并檢測相關指標，為進一步的血液相容性及細胞相容性檢測奠定基礎。
　　方法:①以殼聚糖為原料，采用化學合成法制備磺化殼聚糖（sulfated chitosan，SCS）并對其表征，其檢測指標有：紅外光譜檢測分析、含硫量檢測；②對鈦金屬進行預處理，并在其表面層層自組裝構建VEGF/SCS多層膜；對鈦金

2、屬表面涂層進行表征分析，檢測指標有：接觸角測量、表面形貌觀察、表面VEGF含量檢測。
　　結果:①經化學合成后，殼聚糖分子鏈上成功添加上具有抗凝血活性的硫酸酯結構，其含硫量經檢測為6.7％；②預處理的鈦金屬表面經層層自組裝血管內皮生長因子/磺化殼聚糖（VEGF/SCS）多層膜后，其水接觸角下降(43.16±1.55°)，親水性增加；預處理的鈦金屬表面疏松多孔，經自組裝多層膜改性后，表面更加光整，結構較為均一；ELISA Kit檢測

3、剩余VEGF165溶液及已收集清洗液中VEGF165含量，以配置的VEGF165總量相減，檢測結果顯示涂層改性的鈦表面VEGF密度為29±2.7ng/cm2。
　　結論:成功合成了帶有磺酸酯結構的磺化殼聚糖，并且在鈦金屬表面層層自組裝構建了血管內皮生長因子/磺化殼聚糖多層膜結構，為進一步實驗奠定了基礎。
　　第二部分鈦表面血管內皮生長因子/磺化殼聚糖多層膜的體外血液相容性及細胞相容性檢測
　　目的:評價鈦表面血管內皮生

4、長因子/磺化殼聚糖多層膜的體外血液相容性及細胞相容性。
　　方法:①將試件置于采集的健康人全血中孵育，進行體外溶血試驗，測定凝血酶原時間（PT）、活化部分凝血酶原時間（APTT）；另取健康人全血離心，將得到的富血小板血漿(PRP)與試件接觸，進行血小板粘附試驗；②將鈦試件置于生長期的內皮細胞培養(yǎng)板中，進行細胞增殖實驗、NO分泌檢測、表面形貌觀察。
　　結果:①鈦表面血管內皮生長因子/磺化殼聚糖多層膜體外溶血率為0.567%，

5、與對照組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；②涂覆有VEGF/SCS多層膜的Ti試件可延長APTT（49.29±1.05）s，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），對PT未見明顯影響；③掃描電鏡下示血小板粘附試驗中，涂覆有VEGF/SCS多層膜的Ti試件表面血小板粘附數量較對照組明顯減少。④細胞增殖實驗表明，多層膜結構的鈦金屬表面的細胞相對增殖能力強于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；⑤多層膜結構的鈦金屬組NO分泌量增加

6、，與對照組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；⑥掃描電鏡下可見多層膜結構的鈦金屬組表面內皮細胞鋪展數量多于對照組。
　　結論:血管內皮生長因子/磺化殼聚糖多層膜改性的鈦金屬試件具有良好的血液相容性，也具有較好的細胞相容性。
　　第三部分鈦表面血管內皮生長因子/磺化殼聚糖多層膜的體內血液相容性檢測
　　目的:評價鈦表面血管內皮生長因子/磺化殼聚糖多層膜的體內血液相容性
　　方法:將15只新西蘭大白兔隨機分為三組，分別

7、為：裸鈦金屬組、鈦-血管內皮生長因子/磺化殼聚糖多層膜組、正常血管組，每組五只，建立兔頸動脈腔內植入模型；于1周后取出植入樣品及植入段血管組織，肉眼觀察樣品表面和血管內壁血栓形成情況，HE染色切片鏡下觀察血管組織。
　　結果:鈦-血管內皮生長因子/磺化殼聚糖多層膜組與裸鈦金屬組相比，植入試件段血管腔內未見明顯的血栓和纖維組織，血管內表面較為光整，與正常血管內表面相似；鈦-血管內皮生長因子/磺化殼聚糖多層膜試件表面未見明顯血栓形成。