棉鈴蟲(chóng)核型多角體病毒ORF34、ORF44的序列分析與原核表達(dá).pdf

1、棉鈴蟲(chóng)核型多角體病毒(HearNPV)可特異性侵染棉鈴蟲(chóng)，是理想的棉鈴蟲(chóng)生物防治因子。HearNPV的兩個(gè)分離株C1、G4的基因組全序列已經(jīng)測(cè)定。一些基因的功能已經(jīng)闡明，ORF34、ORF44是兩個(gè)功能未知的基因，本研究對(duì)ORF34、44基因進(jìn)行了克隆、序列分析和原核表達(dá)研究，首次分析并確認(rèn)了HearNPV的ORF34、ORF44基因?yàn)镠earNPV的特有基因，基因表達(dá)產(chǎn)物也為后續(xù)研究提供了基礎(chǔ)。 HearNPV ORF34基因

2、全長(zhǎng)1080nt，編碼359aa，預(yù)測(cè)編碼蛋白分子量為41.2 kDa。序列分析顯示，ORF34具有三個(gè)桿狀病毒早期基因轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子特征序列。分析發(fā)現(xiàn)ORF34的推導(dǎo)氨基酸序列中含有1個(gè)強(qiáng)跨膜螺旋區(qū)域，15個(gè)磷酸化位點(diǎn)和1個(gè)糖基化位點(diǎn)。除HezeNPV ORF34外，未發(fā)現(xiàn)與ORF34氨基酸同源性高于30％的基因。構(gòu)建了pET-34表達(dá)載體，并在大腸桿菌BL21中得到了表達(dá)，表達(dá)的融合蛋白分子量為42kDa，與預(yù)測(cè)編碼蛋白分子量大小相符。

3、序列分析研究結(jié)果表明ORF34是HearNPV的一個(gè)特有基因。 HearNPV ORF44基因全長(zhǎng)1137nt，編碼378aa，預(yù)測(cè)編碼蛋白分子量為42.7kDa。序列分析顯示，ORF44具有雙相啟動(dòng)子特征序列，同時(shí)兼有桿狀病毒早期和晚期基因轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子特征序列。分析發(fā)現(xiàn)ORF44的推導(dǎo)氨基酸序列中含有1個(gè)強(qiáng)跨膜螺旋區(qū)域，32個(gè)磷酸化位點(diǎn)和4個(gè)糖基化位點(diǎn)。除HezeNPV ORF45外，未發(fā)現(xiàn)與ORF44氨基酸同源性高于30％的基