2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、桿狀病毒P10蛋白屬于極晚期表達蛋白,是病毒復(fù)制的非必需蛋白。在感染晚期可以觀察到宿主細胞的細胞質(zhì)和細胞核中均有纖維結(jié)構(gòu)的存在,這些纖維結(jié)構(gòu)的形成與P10蛋白有關(guān)。同時,P10蛋白可能還參與了多角體囊膜的形成,對多角體的穩(wěn)定可能起到一定的作用。后來有免疫學(xué)研究者提出,P10蛋白在結(jié)構(gòu)上與細胞的骨架元素有相似性,而且能夠與這些元素發(fā)生相互作用。如果能夠得到P10蛋白的三維空間結(jié)構(gòu),將能更好的研究P10蛋白的各種作用機制。
   本

2、文以大腸桿菌表達家蠶核型多角體病毒P10蛋白,探索原核表達的P10蛋白的理化性質(zhì)和結(jié)晶條件。首先構(gòu)建pET-32a-p10重組表達載體并在大腸桿菌中表達。在NaCl濃度超過100mM的溶液中,表達的His6-P10重組可溶性蛋白經(jīng)4℃靜置8-10h發(fā)生自然沉降,而在不含NaCl的溶液中又會恢復(fù)到溶解狀態(tài),經(jīng)實驗證明,這兩種狀態(tài)可逆。Western Blotting和質(zhì)譜進一步鑒定,證明發(fā)生自然沉降的物質(zhì)是重組蛋白His6-P10,通過調(diào)

3、節(jié)溶液中NaCl的濃度獲得較純的重組蛋白。對自然沉降的重組蛋白進行非變性凝膠電泳分析,發(fā)現(xiàn)重組蛋白以聚體的形式存在于溶液中。為了探索P10蛋白的存在狀態(tài),構(gòu)建pGEX-6P-1-p10載體,利用prescission protease對重組蛋白進行酶切,得到P10蛋白。經(jīng)非變性凝膠電泳分析發(fā)現(xiàn)P10蛋白也是以聚體的形式存在于溶液中。P10蛋白在被感染的宿主細胞中會形成纖維結(jié)構(gòu),而在原核表達狀態(tài)下會以聚體的形式存在,說明P10蛋白分子之間

4、可能存在某種相互作用,使其具有這種特性。為了進一步推進家蠶核型多角體病毒P10蛋白的研究,首先要從P10蛋白的空間結(jié)構(gòu)來解釋該蛋白的上述特性,因此初步篩選了His6-P10重組蛋白和P10蛋白的結(jié)晶條件。
   多角體病毒形成的包涵體主要是由多角體蛋白和P10蛋白構(gòu)成,并且形成了多面體結(jié)構(gòu)。為了研究這兩種蛋白在組裝過程中的相互作用,對這兩種蛋白進行融合表達、結(jié)晶和空間結(jié)構(gòu)研究,構(gòu)建pET-28a-polh-p10重組表達載體,利

5、用多角體蛋白不同pH條件下的溶解特性分離表達的重組蛋白,并以凝膠過濾層析純化,將純化產(chǎn)物進行結(jié)晶條件的初篩。
   由于本實驗室得到的MnSOD蛋白易于結(jié)晶,因此希望能將P10蛋白與其融合表達,在MnSOD結(jié)晶堆積的同時,牽引P10蛋白一起結(jié)晶,進而解析P10的空間結(jié)構(gòu)。因此,我們構(gòu)建了pET-28a-MnSOD-p10,得到的重組蛋白經(jīng)過40℃處理、鎳離子金屬螯合親和層析純化,并將純化產(chǎn)物進行結(jié)晶條件的初篩。最后得到MnSOD

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