電針對ApoE---小鼠LDLR和PPARγ表達的影響.pdf

1、[目的]:
　　觀察針刺干預ApoE-/-小鼠后的主動脈竇斑塊的形態(tài)和斑塊部位LDLR、PPARγ蛋白的表達變化、肝臟形態(tài)和肝臟細胞LDLR蛋白的表達變化以及各組小鼠間血漿氧化低密度脂蛋白和載脂蛋白B含量的差異，探討針刺改善ApoE-/-小鼠主動脈竇動脈粥樣硬化斑塊病理因素的影響機制。
　　[方法]:
　　實驗一:將6周齡38只ApoE-/-小鼠隨機分成兩組，高脂高膽固醇飲食組（HF組）34只，給予含21％脂肪、1.2

2、5％膽固醇的飼料喂養(yǎng)，中等脂肪飲食組（MF組）4只，給予含10％脂肪的飼料喂養(yǎng)。HF組因飼養(yǎng)不當死亡1只。14周后，從HF組中隨機選擇3只小鼠，將其與4只MF組小鼠全部處死，采集血漿，檢測血脂含量;取主動脈竇，行常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)染色、冰凍HE染色和油紅0染色;取腹主動脈，行常規(guī)HE染色。上述動脈病理切片光鏡下觀察并判斷造模是否成功，同時，比較不同脂肪和膽固醇含量飼料喂養(yǎng)后小鼠的Lee's指數(shù)、肝體比、體脂比、血脂以及動脈病理切片

3、的變化。
　　實驗二:將剩余30只20周齡HF組ApoE-/-小鼠隨機分為10只藥物對照組（F組）、10只針灸治療組（A組）、10只模型對照組（M組），繼續(xù)給予高脂高膽固醇飲食喂養(yǎng)。同時，將5只喂食普通飼料的C57BL/6J小鼠作為空白對照組（BC組）。藥物對照組給予辛伐他汀灌胃治療，40mg/kg.d，針灸治療組給予針刺“內關、后三里（足三里）、三陰交、神門”治療。治療11周后，采集各組小鼠血漿檢測血脂;檢測各組小鼠血漿氧化低密

4、度脂蛋白和載脂蛋白B含量;取小鼠主動脈竇，行HE染色觀察各組小鼠主動脈竇斑塊的形態(tài)變化，行免疫組化染色檢測各組小鼠主動脈竇斑塊部位PPARγ、LDLR表達的差異;取小鼠肝臟，行HE染色觀察各組小鼠肝臟細胞的形態(tài)變化，行免疫組化染色檢測各組小鼠肝臟LDLR表達的差異，行Western blot法檢測各組小鼠肝臟LDLR蛋白表達的差異。
　　[結果]:
　　實驗一:
　　1、MF組和HF組Lee's指數(shù)、肝體比、體脂比檢測

5、結果:MF組的Lee's指數(shù)、肝體比、體脂比的略高于HF組，但沒有顯著性差異。
　　2、MF組和HF組血脂檢測結果:MF組的血脂（總膽固醇TC、甘油三酯TG、高密度脂蛋白HDL-C、低密度脂蛋白LDL-C）濃度略高于HF組，但沒有顯著性差異。
　　3、MF組和HF組主動脈竇切片檢測結果:MF組和HF組主動脈竇有明顯脂質斑塊形成，斑塊中有大量脂質沉積和泡沫細胞積聚，并出現(xiàn)大塊壞死核和柳葉狀的膽固醇結晶體，中膜內彈力纖維排列比較

6、完整，MF組和HF組均處于纖維斑塊的早期。
　　4、MF組和HF組腹主動脈切片檢測結果: MF組和HF組腹主動脈HE染色切片可見內膜無脂質斑塊形成，MF組內彈力板迂曲形成腹動脈瘤
　　實驗二:
　　1、M組、F組、A組、BC組Lee's指數(shù)、肝體比、體脂比檢測結果:A組的Lee's指數(shù)、體脂比與M組相比較小，有顯著差異(P＜0.05，P＜0.05)，A組的肝體比小于與M組。
　　2、M組、F組、A組、BC組血液檢

7、測結果:
　　2.1 M組、F組、A組、BC組血脂檢測結果:M組、F組、A組TC、TG、LDL濃度高于BC組，均存在顯著性差異(P＜0.05);M組、F組、A組之間各血脂成分濃度相近，不存在顯著性差異。
　　2.2 M組、F組、A組、BC組血漿ApoB、OX-LDL檢測結果:A組ApoB、ox-LDL含量明顯低于M組，存在顯著性差異(P＜0.05);BC組的ApoB、ox-LDL含量要顯著低于其他各組。
　　3、M組、

8、F組、A組主動脈竇切片檢測結果:
　　3.1 M組、F紐、A組主動脈竇HE染色結果:A組主動脈竇斑塊面積和斑塊占血管百分比明顯低于M組(P＜0.05)，A組主動脈竇斑塊內膜單位視野內的細胞數(shù)明顯高于M組(P＜0.05)，A組主動脈竇斑塊中膜單位視野內的細胞數(shù)高于M組，A組主動脈竇血管中膜內膠原纖維層最大厚度大于M組(P＜0.05)，這表明針刺能夠減少脂質斑塊面積，抑制斑塊內膜下細胞凋亡和壞死，抑制平滑肌細胞的遷移和膠原纖維的降解，

9、明顯抑制斑塊的發(fā)展。
　　3.2 M組、F組、A組主動脈竇PPARγ免疫組化染色結果:A組主動脈竇斑塊中膜單位視野內表達PPARγ蛋白的細胞數(shù)高于M組(P＜0.05)，表明針刺能夠提高主動脈竇斑塊內的PPARγ蛋白的表達，抑制中膜內炎癥的進展。
　　3.3 M組、F組、A組主動脈竇LDLR免疫組化染色結果:A組主動脈竇斑塊內膜單位視野內表達LDLR蛋白的細胞數(shù)與M組無明顯差異，表明針刺治療對主動脈竇斑塊內膜下LDLR蛋白的表

10、達無明顯影響。
　　4、M組、F組、A組、BC組切片肝臟檢測結果:
　　4.1 M組、F組、A組、BC組肝臟HE染色結果:A組肝臟肝腺泡3區(qū)的單位視野肝細胞數(shù)明顯高于M組(P＜0.05)，A組肝臟肝腺泡3區(qū)的肝細胞內未出現(xiàn)M組肝細胞中出現(xiàn)的大顆粒脂滴，表明針刺抑制肝細胞的凋亡和壞死，針刺減少肝臟細胞內脂滴大小，減少脂肪變性等炎癥狀態(tài)。
　　4.2 M組、F組、A組、BC組肝臟LDLR免疫組化染色結果:A組肝臟肝腺泡3區(qū)

11、的單位視野內表達LDLR蛋白的肝臟細胞數(shù)明顯高于M組(P＜0.05)，表明針刺提高肝細胞LDLR蛋白表達。
　　5、M組、F組、A組、BC組肝臟LDLR的蛋白質免疫印跡雜交(Western blotting)結果:針刺后肝臟內細胞LDLR蛋白表達增高。
　　[結論]
　　針刺治療能通過調節(jié)肝臟和血管內脂質和能量代謝、抗氧化、抗炎癥、抑制血管平滑肌細胞遷移增殖、抑制血管斑塊破裂、抑制肝臟細胞、平滑肌細胞、泡沫細胞等細胞的