苦蕎蛋白的分離提取及其對ApoE---動脈粥樣硬化小鼠的影響.pdf

1、目的：本課題旨在分離提取苦蕎蛋白的基礎(chǔ)上，評價苦蕎蛋白各組分的體外抗氧化能力；并將苦蕎蛋白作用于建立成功的ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化（AS）模型，通過觀察苦蕎蛋白對 ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化疾病的影響，初步探討苦蕎蛋白與動脈粥樣硬化（AS）的相關(guān)性。
　　方法：1.采用堿溶酸沉法分離苦蕎總蛋白，并根據(jù)蛋白溶解性不同分離出苦蕎清蛋白和球蛋白；采用考馬斯亮藍蛋白定量法測定各組分的蛋白含量，SDS-PAGE凝膠電泳觀察各蛋白組

2、分的分子量分布情況；通過測定各蛋白組分的抑制羥自由基產(chǎn)生能力和抗超氧陰離子能力來評價各蛋白組分的體外抗氧化活性；2.以8周齡健康雄性ApoE-/-小鼠作為研究對象，采用高脂飼料喂養(yǎng)以加速ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化的模型建立，并定期收集各組小鼠的血清，采用酶法檢測血清甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平；主動脈血管采用油紅O染色；3.72只ApoE-/-雄性小鼠隨機

3、分為8組，即正常飲食對照組、高脂飲食模型組、總蛋白預(yù)防組、清蛋白預(yù)防組、球蛋白預(yù)防組、總蛋白治療組、清蛋白治療組及球蛋白治療組，每組9只。正常飲食對照組給予普通飼料喂養(yǎng)，高脂飲食模型組給予高脂飼料喂養(yǎng)，各蛋白預(yù)防組在給予高脂飲食的同時給予各蛋白（25mg/kg/d）灌胃10周，各蛋白治療組在高脂喂養(yǎng)10周后再給予各蛋白（25mg/kg/d）灌胃，連續(xù)給藥10周后處死小鼠，收集小鼠血清樣本，并進行各項血脂水平及血清氧化低密度脂蛋白（ox-

4、LDL）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、可溶性細胞間粘附分子-1（sICAM-1）水平檢測，以觀察相關(guān)指標的變化狀況。
　　結(jié)果：1.每克脫脂苦蕎粉中苦蕎總蛋白、清蛋白和球蛋白的含量分別為82.05、13.24和4.37mg；各蛋白的分子量分布不同；體外抗氧化測定中總蛋白、清蛋白和球蛋白均具有抑制羥自由基產(chǎn)生能力和抗超氧陰離子能力，且球蛋白的體外抗氧化能力高于總蛋白和清蛋白（p<0.05）；2.經(jīng)高脂飼料

5、誘導(dǎo)的ApoE-/-小鼠的血清TG和TC水平均比未經(jīng)誘導(dǎo)的ApoE-/-小鼠顯著升高(p<0.05)；高脂誘導(dǎo) ApoE-/-小鼠的主動脈斑塊面積占整體主動脈面積的65％，顯著高于ApoE-/-小鼠的正常飲食組（21％）(p<0.05)，同時主動脈根部的血管壁明顯增厚，管腔變窄；3.和高脂喂養(yǎng)的模型組相比，經(jīng)總蛋白、清蛋白、球蛋白進行預(yù)防及治療的各組AS小鼠的血脂TG、TC、LDL-C水平均明顯降低(p<0.05)；各預(yù)防及治療組小鼠的